MCAO模型大鼠中医研究范文

《中国中医基础医学杂志》2014年第六期

1材料与方法

1.1大鼠一般情况监测①体质量:体质量变化分别在手术前、术后24h、48h、72h进行体质量称量、记录;②模型动物精神、活动情况、皮毛、尾色、大便等。

1.2神经功能Zea-Longa评分分别在术后3h、6h、24h、48h、72h进行神经功能Zea-Longa评分，评分由两位实验人员共同观察记录，每只大鼠仅做1次神经功能Zea-Longa评分，实验要求在单盲的条件下进行。

1.3放免法检测血清CORT实验末，大鼠经麻醉后由腹主动脉取血3ml加入空白试管中，4℃3000r/min离心15min，取上清置于-70℃冰箱中保存备用，放免法检测血清CORT含量，由北京康源瑞德生物科技有限公司严格按照试剂盒说明书要求进行检测。

1.4脑组织形态学观察大鼠经腹主动脉取血后夹闭腹主动脉，剪开胸部将灌注针由左心室穿入主动脉，依次注入0.9%生理盐水和4%多聚甲醛。灌注30min后，取出脑固定于4%多聚甲醛中24h，石蜡包埋。经HE染色，于光学显微镜下观察大鼠脑组织织形态学改变。

1.5统计学方法采用SPSS13.0统计软件进行统计分析，所有数据以均数±标准差(x珋±s)表示，数据符合正态分布，多个样本均数比较采用单因素方差分析，多个样本均数间的两两比较用最小显著差法(leastsignificantdifference，LSD)。如方差不齐或不符合正态分布，用非参数检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1大鼠一般状况一般大鼠在手术完成后1.5～2h苏醒，手术完成3h后开始进行评分，可见大鼠偏瘫症状明显，表现为右侧肢体废用或力弱、前肢力弱、后肢拖拽，行走呈顺钟向追尾状，甚则向一侧倾倒;此外还可观察到，48h、72h手术组的大鼠在造模后24h均出现左侧睑裂变小、左眼球肿胀并伴有分泌物，活动减少，身体蜷缩，体质量明显下降及肛周污染、稀便、舌质紫暗等症状，各时点假手术组动物均未出现神经功能缺损症状。

2.2各组大鼠体质量变化表1显示，与假手术组比较，术后24h、48h、72h各时间点手术组大鼠体质量均明显降低(P＜0.05或P＜0.01)。

2.3各组大鼠神经功能Zea-Longa评分变化表2显示，与假手术组比较，各时间点手术组大鼠Zea-Longa神经功能评分均明显增高(P＜0.01)。

2.4各组大鼠血清CORT水平变化表3显示，与正常组比较，假手术6h、48h、72h组血清CORT有所升高，但差异无统计学意义(P＞0.05);手术6h、48h、72h组血清CORT明显升高，与48h、72h组比较差异有统计学意义(P＜0.01)。与假手术组比较，手术48h、72h组血清CORT明显升高(P＜0.05或P＜0.01)。与手术6h组比较，手术72h组血清CORT明显升高(P＜0.01)。

2.5各组大鼠脑组织形态学观察正常组、假手术6h、48h组及假手术72h组神经细胞形态完整，排列紧密，细胞核呈蓝紫色，胞浆呈粉红色，胞核完整，核仁清晰，细胞周围间隙无水肿，各时点均无炎性细胞浸润，也无梗死灶。缺血6h组缺血侧大脑皮质神经元数量减少，结构破坏，排列紊乱，细胞体积大小不一，形态不规则，部分细胞空泡样变，胞核深染，核膜不清，核仁不明显，间质疏松，呈网状改变，血管周围间隙增宽。缺血48h组缺血侧大脑皮质神经元缺血性损害加重，进一步变性坏死、溶解，间质更加疏松，空泡样变明显。缺血72h组缺血侧大脑皮质神经元缺血性损害进一步加重，变性坏死、溶解，间质更加疏松，空泡样变明显。

3讨论

中医证候是机体生理病理整体反应状态的概括，四诊信息实际上就是证候的表征。动物证候表征研究具有较好的稳定性、可视性、可测性和可重复性［2］。MCAO大鼠模型是国内外研究缺血性中风的经典模型，改进后的线栓法简便、易重复，降低了动物死亡率，提高了成功率，复制的可逆性局灶性脑缺血模型是研究脑缺血再灌注损伤较为理想的模型［3］。在MCAO大鼠模型、双侧颈总动脉结扎大鼠模型、单侧颈总动脉结扎大鼠模型的3种脑缺血模型中，MCAO模型可能为最合适的诱发血瘀证生物表征的脑缺血模型［4］。本研究结果显示，MCAO大鼠模型呈现活动减少、蜷缩、精神萎靡、毛色枯槁、饮食减少、体质量明显下降、肛周污染、稀便、舌质紫暗等症状，造模初期可见偏瘫症状明显，表现为右侧肢体废用或力弱，行走呈顺钟向追尾状，甚则向一侧倾倒。MCAO大鼠模型临床表现符合肾虚血瘀证候标准［5］。

中医认为，“年四十而阴气自半，起居衰矣”，年老肾精不足，元气亏虚，脏腑功能衰弱，肢体活动迟缓，气血运行缓慢，血流不畅致脑脉瘀滞不通而发中风。正如《医林改错•王清任》曰:“半身不遂，亏损元气，是其本源。”《医学衷中参西录•张锡纯》亦云:“人之脑髓空者……甚或猝然昏厥，知觉运动俱废。”下丘脑-垂体-肾上腺轴是机体神经内分泌系统重要的组成部分。虽有报道显示与正常人比较，肾阳虚患者尿17羟皮质类固醇降低，而肾阴虚患者时高时低、变化不定［6］。但随着年龄的增长，血清皮质醇水平逐渐上升，高龄老年者更加明显［7］。神经-内分泌-免疫网络的功能失调将进一步加重脑缺血再灌注后的神经元损伤。脑缺血再灌注后2～24h时间内，实验大鼠血浆的ACTH、CORT含量明显增高［8］。脑缺血后大鼠垂体体质量明显减轻，血浆CRH、ACTH和CORT浓度呈一致性先短暂升高后持续下降［9］。本研究结果显示，模型大鼠在缺血6h时血清CORT增高，随着缺血时间的延长，血清CORT进一步增高，表明大鼠存在神经内分泌功能紊乱。

MCAO30min缺血侧基底结区首先出现大量的暗神经元和坏死，至MCAO1h这些改变逐渐扩展到皮层。如果组织持续缺血、坏死和暗神经元将在组织水肿期后急剧增多，这些改变并不因组织灌注的恢复而逆转［10］。本研究发现，模型大鼠脑组织形态学发生明显改变，在梗死侧皮层区神经元数量减少，结构破坏，排列紊乱，而缺血48h组、72h组缺血侧大脑皮质神经元变性坏死、溶解，间质更加疏松，空泡样变明显。本研究从MCAO大鼠模型临床表征及生物学基础进行探讨，表明MCAO大鼠存在明显的肾虚血瘀证候，为中医药研究脑中风提供实验基础。

作者：吴相春王少卿唐璐朱文浩高颖单位：北京中医药大学东直门医院神经内科