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HCV核心抗原的化学检测在肝炎中的应用

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摘要:应用化学发光法(chemiluminescentimmunoassay,CLIA)检测来自住院及门诊220例样本的HCV-cAg、HCV-Ab,并对其进行HCV-RNA定量分析,以了解HCV-cAg在HCV诊断中的应用价值。结果表明,第一组75例高危人群筛查样本中HCV-Ab有15例阳性(20%),HCV-cAg6例阳性(8.0%),HCV-RNA7例阳性(9.3%)。第二组70例确诊组样本中HCV-Ab66例阳性(94.3%)、HCV-cAg62例阳性(88.6%)、HCV-RNA60例阳性(85.7%)。第三组75例健康人群的筛查样本中HCV-Ab5例阳性(6.7%)、HCV-cAg2例阳性(2.7%)、HCV-RNA无阳性病例。HCV-Ab和HCV-cAg联合检测阳性率与HCV-RNA比较差异有统计学意义(P<0.05)。在筛查HCV感染时,CLIA法检测HCV-cAg的检出时间早于HCV-Ab,HCV-cAg与HCV-Ab联合检测对术前患者HCV筛查更具有临床价值。

关键词:化学发光法;丙型肝炎病毒;HCV-cAg;HCV-Ab

HCV已呈全球性流行。据世界卫生组织统计,全球HCV的感染率约为3%,估计约1.7亿人感染HCV,每年新发病例约3.5万例[1]。在我国,病毒性肝炎的发病患者数始终位于所有传染病的前列,而HCV的发病率在病毒性肝炎中呈现逐年上升趋势。在目前还没有疫苗的情况下,早期发现、早期治疗至关重要。化学发光法(chemilumi-nescentimmunoassay,CLIA)检测HCV-cAg可将窗口期缩短至35.8d,并且抗原量与RNA水平呈平行变化趋势。CLIA检测HCV-cAg采用全自动预处理步骤裂解病毒颗粒,并结合抗原抗体复合物,消除检测HCV-cAg时HCV-Ab的干扰。HCV-cAg检测能对HCV感染进行诊断并能监测感染者的病情变化。本文对本院住院输血和手术前及门诊的患者,以及市疾控中心患者共计220份样本,进行HCV-cAg、HCV-Ab和HCV-RNA检测,以了解HCV-cAg试剂在筛查HCV感染时的有效性。

1对象与方法

1.1研究对象

研究对象为2016年1月至2018年2月来我院就诊、体检的人员,将其分为3组:第一组HCV高危人群组(75例)为根据《中华人民共和国卫生行业标准———丙型病毒性肝炎筛查及管理》中对于高危筛查人群的要求进行收集,标本采集于市疾控中心就诊检测人员、市看守所聚众吸毒人员、我院初诊检测HCV的患者、ALT>80U/L伴胆红素升高患者以及手术前(含输血前)做例行检查的患者。第二组HCV确诊组(70例)为总院感染科HCV确证患者、总院肾脏内科HCV确证患者、某市疾控中心确证患者。符合下列任何一项即可诊断为临床感染HCV病例:(1)符合血清HCV-Ab阳性和流行病学史;(2)符合血清HCV-Ab阳性和临床表现;(3)符合血清HCV-Ab阳性和血清ALT、AST升高。纳入标准:(1)年龄1~78岁,性别不限;(2)符合HCV的诊断标准。排除标准:肝硬化、重叠HBV感染、自身免疫性肝炎。第三组阴性对照组(75例)为同期体检的健康人。对3组分别进行HCV-Ab、HCV-cAg、HCV-RNA检测。

1.2方法

采用分离胶专用试管抽取患者静脉血3mL,离心取血清,并放置在-70℃冰箱中保存。(1)HCV-cAg检测:采用HCV-cAg微粒子CLIA检测试剂盒进行HCV-cAg检测,试剂盒由美国雅培公司提供。(2)HCV-Ab检测:采用HCV-Ab微粒子CLIA检测试剂盒进行HCV-Ab检测,试剂由美国雅培公司提供。(3)HCV-RNA检测:采用RT-PCR,测定范围在103~107拷贝/mL,HCV-RNA阴性判定标准:小于103拷贝/mL。HCV-RNA检测试剂由中山大学达安基因股份有限公司提供。

1.3统计学处理

采用SPSS17.0进行数据处理分析,数据均以百分率(%)表示,用χ2检验比较差异,用kappa检验检测结果的一致性。以P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.13组样本HCV-Ab、HCV-cAg、HCV-RNA检测结果

结果见表1。高危组中HCV-cAg与HCV-RNA阳性率结果相一致,分别为8.0%和9.3%。确诊组中HCV-cAg与HCV-RNA的阳性率结果分别为88.6%和85.7%,其中HCV-Ab的阳性率达到94.3%。阴性对照组中,HCV-Ab检测阳性率高于HCV-cAg,分别为6.7%和2.7%。总体上HCV-Ab的阳性检出率高于HCV-cAg。

2.2高危组75例样本HCV-Ab、HCV-cAg和HCV-RNA检测结果

以HCV-RNA为金标准,将不同组合模式下的HCV-Ab+HCV-cAg与HCV-RNA进行相关性分析。分析结果表明,HCV-Ab(+)+HCV-cAg(+)组检测的阳性率为66.7%,高于HCV-Ab(+)+HCV-cAg(-)组的20.0%,说明HCV-Ab和HCV-cAg联合检测有助于提高HCV的阳性筛查率,减少假阳性的产生(P<0.05,表2)。

2.3确诊组样本HCV-Ab、HCV-cAg和HCV-RNA检测结果

以HCV-RNA为标准,对确诊组的70例样本进行检测,最后确诊60例样本为HCV-RNA阳性,10例为阴性。将不同组合模式下的HCV-Ab+HCV-cAg与HCV-RNA进行相关性分析。分析结果显示,HCV-Ab(+)+HCV-cAg(+)组检测结果阳性率为96.4%,分别高于HCV-Ab(+)+HCV-cAg(-)组合下的86.4%、HCV-Ab(-)+HCV-cAg(+)组合下的87.5%。以上结果表明HCV-Ab联合HCV-cAg能提高检测的阳性率(P<0.05,表3)。

3讨论

目前血清HCV-RNA检测已成为诊断HCV感染的“金标准”,其定量分析法的特异度为(98~99)%,高敏感度的病毒核酸扩增技术甚至可以在HCV感染后6d内检测到HCV-RNA。病毒核酸扩增技术准确敏感,但试剂成本较高、操作繁琐、实验室各项条件要求极高,影响了此方法在HCV常规筛查中的应用。检测HCV感染最初推荐用HCV-Ab指标。在临床上,对大部分肝脏疾病患者而言,筛查检测的灵敏度和特异度均较高,HCV-Ab假阳性情况较为少见。然而,在HCV感染率低的人群中(如无偿献血者、现役或退役军人、普通人群、卫生保健从业人员、性病门诊就诊者),假阳性率较高,阳性预测值较低[2]。HCV-Ab产生假阳性的主要原因有:高IgG血症、RF干扰、超氧化物歧化酶干扰、用于试剂制备的HCV-cAg不纯[2]。由于以上原因,不能仅仅依靠筛查实验阳性反应结果来诊断一个人是否患HCV。因此,研究者需要应用具有更高特异度的补充实验进行确证筛查。HCV-cAg作为一种新的HCV感染诊断指标,可用于献血人员的筛查,且因其检测时间段为感染后14~70d,窗口期比HCV-Ab短,可明显增强输血安全,亦能监测抗病毒治疗疗效。因此HCV-cAg的检测对HCV的早期感染以及免疫功能紊乱和一些不产生HCV-Ab的患者很有价值[3]。HCV-cAg对HCV-Ab有一定的补充作用,但由于HCV-cAg的检测灵敏度较低,在HCV的筛查中尚不能取代HCV-Ab的作用,只能作为补充,联合检测HCV-cAg与HCV-Ab可以提高HCV的筛查率[4]。有资料显示,伴随病毒血症的发生,大多数HCV感染者血清中可检测到HCV-cAg,其滴度和RNA水平明显相关,在血清中的含量也可作为病程进展的指示,或抗体阳性慢性患者抗病毒治疗的监控指标[5-6]。现行的常用筛检方法有ELISA,它具有简便、快速、灵敏度及特异度较好的特点,但对灰区结果判读的可靠性通常较差[7]。CLIA的优势主要体现在具有发光反应的高灵敏度[8],具有免疫反应的特异度[9]。与ELISA法比较,该方法优点在于全自动化分析,省时以及可重复率高,定量最小值可达皮克级[10]。荧光定量PCR法检测HCV-RNA可反映患者体内病毒复制情况,是HCV感染的确证实验。它检测的窗口期短,约为14d[11],但受到实验操作繁琐、价格昂贵等诸多因素的影响,难以在常规实验室或基层医院应用推广和普及[12]。本实验采用微粒子CLIA,定量检测人血清或血浆中HCV-cAg含量,能够诊断HCV感染及监测患者病情,并且该操作实现全面自动化,整个过程在雅培Architecti2000进行,大大减少了对实验者的操作要求,也提高了检测的精密度。HCV-cAg在血液中比HCV-Ab出现早,HCV感染后,检测HCV-Ab窗口期长达70余天,因此在感染早期,HCV-Ab阴性不能排除HCV感染;急、慢性活动性HCV感染的标志是HCV-cAg的存在,类似于HbsAg在活动性HBV感染中的诊断意义。通过对3组共220例样本进行HCV诊断,结果表明HCV-Ab检测的阳性率高于HCV-cAg和HCV-RNA,HCV-cAg阳性率与HCV-RNA阳性率结果一致,差异无统计学意义。以HCV-RNA检测为金标准,通过对高危组和确诊组进一步分析,HCV-Ab和HCV-cAg联合检测阳性率显著高于单独HCV-Ab检测。由于CLIA法检测HCV-cAg能缩短HCV病毒感染的窗口期,并且抗原量与RNA水平呈平行变化趋势,因此通过CLIA法将HCV-Ab和HCV-cAg两者有效联合诊断能够提高HCV检出率和诊断可靠性。

参考文献

[1]李婷婷,殷森,黎诚耀.丙型肝炎疫苗最新研究进展———挑战与希望并存[J].现代免疫学,2015,35(1):81-87.

[2]陈新月,任姗.《丙型肝炎防治指南》(2015年更新版)解读[J].北京医学,2015,37(12):1186-1188.

[3]邵芳.HCV抗原、HCV抗体及HCV-RNA联合检测与ALT的相关性及其临床意义[J].中国中西医结合消化杂志,2014,22(2):81-82.

作者:孟繁君 王利新 王琦 单位:宁夏医科大学总医院心脑血管病医院

诊断病理学杂志责任编辑:张雨    阅读:人次
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