大鼠脑组织灌注方法的改进范文

《医学研究生学报》2014年第六期

1结果

1．1主要优点①可操作性强。手术操作空间大，出血量少，术野清晰;可以容易地发现胸主动脉并将其夹闭，避免了对腹部及下肢的固定;去除针尖的灌注针不易刺破心脏及血管，插至升主动脉，较单纯插入左心室进行固定，效果明显提高。②省时。从胸腔暴露至开始灌注时间约30s，此时心脏搏动依然有力;灌注时间约5min，此时右心耳流出清亮液体;固定开始后即可发现大鼠上肢及胡须抽动，约5min后大鼠颈部僵硬，15min完成固定。③省液。灌注液耗量80～100mL;固定液耗量约80mL。

1．2固定后效果大鼠只有头部及上肢固定并僵硬，腹部和下肢并未固定，鼠尾依然柔软。固定后，脑组织冰冻切片行免疫荧光检测，正置荧光显微镜下神经元细胞核特异性抗原-Neun表达清晰，见图1。

2讨论

在有关脑组织的各种常规病理形态、免疫组化等实验研究中需要对脑组织进行固定处理，以保持蛋白类抗原。因为脑组织耐氧能力差，抗原易发生变性，所以需要对脑组织快速固定［5－6］。整块脑组织浸没于固定液，因为固定液不能以相同的速度迅速到达组织的各个部位，所以固定效果差［7－8］。通过大鼠天然的循环系统直接进行灌注固定，因固定液可快速、均匀地分布到脑组织各个部位，所以脑组织标本制备多采用此法［9－10］。关于进针方式目前主要有2种［11］:①经颈总动脉灌注固定，注射针针尖向着头部的方向注入固定液，液体的出口开在颈静脉或左心房上;②在心尖部位进针;打开胸腔，用针头插入左心室，同时右心房开一孔。

第1种方法技术难度大，成功率低，故常不用;第2种方法操作相对简便，虽几经完善，但存在操作难度大、耗时耗液、固定效果不佳等多处不足。陈浩宇等［12］采用夹闭腹主动脉，代小思［13］采用夹闭胸主动脉与主动脉弓交界处等方法均存在操作繁琐且耗时较长的缺点，且未对开胸及进针方法行具体描述。Gage等［1］详细描述了开胸方法，但对全身进行灌注固定，存在耗时、耗液的不足。本方法进一步改善灌注固定方法，使其基本完善。创新性主要体现在:改变以往开胸术式、夹闭胸主动脉及处理灌注针头。针对上述3点，有关注意事项:①充分游离胸前壁，操作过程中动作轻柔，剪至胸骨角处，暴露心脏及主动脉弓;②夹闭胸主动脉，提起左侧肺脏，可清楚看到位于脊柱左侧的胸主动脉，其右侧为食管，需要注意，避免错夹;③插灌注针，未经处理的输液管针头，因过于锋利，易插破心脏和血管，在该操作中用眼科剪在心尖部剪开的深度要浅，防止剪破心脏，影响灌注固定效果，通过剪口，插入灌注针，动作要轻慢，针尖方向略偏左侧，以免刺入右心房，灌注针进入升主动脉后，可明显看到其位置，稍加固定，防止滑脱。若对心脏进行固定，可采用股动脉灌注方法［14］，Kasukurthi等［15］报道浸泡固定和经心灌注固定对周围神经的实验结果没有明显差异。总之，该方法针对脑组织等灌注固定具有可操作性强、省时、省液、提高灌注固定效果的优点，值得推广。

作者：卢文朋栗世方单位：青岛大学附属医院神经外科