大鼠子宫内膜异位症模型范文

《实用中西医结合临床杂志》2015年第五期

1材料与方法

1.1观察指标

1.1.1组织形态学观察抽血后，处死大鼠，立即解剖，观察异位包块情况，取异位内膜包块、在位子宫即逆流组、种植组左侧子宫中段及对照的空白组大鼠子宫的一段，甲醛固定，常规制片，HE染色，在光镜下观察在位、异位内膜及正常子宫内膜的组织形态学特点及差异。

1.1.2生化指标术后8周，抽取大鼠腹主动脉血2ml，用ELISA法检测血清中EMAb（antiendometrialantibody，抗子宫内膜抗体），CA125（cancerantigen125，癌抗原125）。

1.2统计学处理采用SPSS17.0统计软件进行分析。计量资料用方差分析，结果以（x±s）表示，P＜0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1组织学观察术后第8周，解剖后见异位内膜包块大小不等，最大的为10.00mm×9.76mm，最小的为2.30mm×2.20mm，包块为囊状，内有积液感，逆流组10只模中有3只未形成囊状，建模成功率为70%；种植组10只模中有1只未形成囊状，建模成功率为90%。种植组成模大鼠异位内膜出现于腹壁5只、卵巢及输卵管4只、皮下2只；逆流组异位内膜出现于腹壁4只、卵巢及输卵管3只、皮下1只。光镜下空白组大鼠子宫内膜上皮细胞排列完整，肌层较厚，结构完整，腺体和血管丰富。逆流组与种植组在位及异位内膜的上皮细胞扁平，呈长柱状或增生呈假复层结构，大部分有分泌现象，少数可见腺体分布，肌层较薄，结构不清。见图1~图3。

2.2生化指标比较各组之间CA125（F=113.407）、EMAb（F=96.449）均有明显差异（P＜0.05），且种植组、逆流组、空白组依次降低（P＜0.05）。

3讨论

3.1造模方式手术移植法是目前国内外报道的建立EMT模型的主要方法。对模型动物的选择，多选用大鼠与兔，该实验选择大鼠，是因为大鼠的激素水平较高，性周期短且规律，对造模的成功及观察较为有利且较经济。该研究采用逆流法模拟人体的经血逆流原理造模，更贴近于临床发病实际，且手术操作简单。实验时手术应做到以下几点：（1）在手术前24h给大鼠灌服戊酸雌二醇，人为的使大鼠在手术时统一在发情期。术中，剖开大鼠腹腔后可见大鼠的子宫均处于充盈状态，方便手术的进行。（2）逆流手术时，分离子宫，将子宫内膜搔刮，接着用生理盐水将其冲入盆腔，缩短了手术时间。子宫内膜异位症可出现在身体的不同部位，但绝大多数位于盆腔内的卵巢、宫底韧带、子宫下部后壁浆膜面及覆盖直肠子宫凹陷、乙状结肠的腹膜层[1]。本实验模拟人体的经血逆流将搔刮后的子宫内膜逆流冲入盆腔，可以观察子宫内膜异位症的多发部位。逆流组及种植组异位内膜均多出现于腹壁，其次为卵巢及输卵管，最后为皮下。手术中保持无菌，使进行造模的大鼠无1只发生术后感染；术后1周，切口已经完全愈合。

3.2观察指标

3.2.1组织形态学观察简单可行，同时测量异位灶的大小，将其量化，更能够准确判断其成模情况，逆流组与种植组均出现内异症病灶，逆流组较种植组组织大体观及镜下观均显示成模率低，但仍有70%建模成功。

3.2.2生化指标EMAb[2]是以子宫内膜为靶抗原，并引起一系列免疫病理效应的自身抗体。目前EMAb被认为是EMT标志性抗体，文献[3]报道EMT患者中EMAb的检出率可达70%~80%。CA125是肿瘤标记物的一种，是一种高分子量的糖蛋白抗原，主要来自分泌期子宫内膜，内膜细胞产生CA125的量代表细胞的增活性。有文献资料报道了血清CA125测定对内异症有较理想的诊断价值[4~6]。研究报道血清CA125与EMAb联合测定可在敏感性下降不多的情况下，明显提高特异性；同时如两者均阳性，EMT的诊断基本成立；两者均阴性诊断基本不成立[7]。因此通过联合检测血CA125、EMAb的变化可以较准确的反映子宫内膜异位症的成模情况。本研究中逆流组较种植组血清CA125与EMAb均低，但较空白组明显升高，证实逆流法建模成功。

3.3原因分析该研究中逆流法成模率较种植法稍低，考虑以下原因：（1）大鼠输卵管组织较细，子宫内膜组织不能够完全通过子宫输卵管进入盆腔；（2）大鼠免疫功能强大，到达盆腔的部分子宫内膜组织可被吞噬而不形成内异症；（3）搔刮过程中脱落的子宫内膜组织的数量致成模率低。经血逆流法制造子宫内膜异位症模型较种植法成模率稍低，但经血逆流法操作更简单、手术时间短、创伤小、术后恢复快，避免了实验中手术因素导致的差异。该实验手术均是对宫腔操作，可以在不开腹的情况下完成，对以后实验应用于大型动物如猿猴等的研究提供了新的造模方法；同时对于其他学说所致子宫内膜异位症也可以提供借鉴。该过程更符合人体发病的自然过程，为以后临床中研究子宫内膜异位症的发病机理及治疗提供了新的方法，也拓宽了临床研究的思路。但该实验仅考虑经血逆流种植因素，其他方面的发病机制仍需进一步研究。

作者：王哲 路芳 单位：山东中医药大学附属医院 山东中医药大学