胃癌组织中高表达及临床意义范文

《基础医学与临床杂志》2015年第十一期

胃癌因高发病率和高病死率严重威胁人类健康，但有关胃癌的发病机制尚未明确。NOB1(Ninonebindingprotein1)是由NOB1基因编码的、参与核糖体小亚基和26S蛋白酶体生物合成的多功能蛋白质;NOB1异常表达可影响核糖体和蛋白酶体的生物合成，而后两者与肿瘤的发生、发展关系密切。应用免疫组织化学法检测胃癌组织中NOB1蛋白的表达，了解NOB1在胃癌中的作用及其与患者预后的关系。

1材料与方法

1.1材料:收集2009年3月至2014年10月行胃癌根治术的胃癌标本66例，平均57.8岁(38～76岁)，男性37例，女性29例;高分化19例，中分化31例，低分化16例;Ⅰ期10例，Ⅱ期25例，Ⅲ期22例，Ⅳ期9例;其中34例有淋巴结转移，32例无淋巴结转移;收集30例距胃癌组织2cm处经病理学证实的非癌胃组织及20例良性病变行胃切除的标本组织作为对照组。

1.2方法:所有标本均经10%甲醛固定，常规石蜡包埋，4μm连续切片。切片脱蜡水化，浸于柠檬酸盐缓冲液经中火档微波处理行抗原修复。然后按照SP免疫组化染色试剂盒说明书进行操作。兔抗人NOB1多克隆抗体(上海研生有限公司)，工作浓度1∶80。用已知阳性片作为阳性对照，用PBS代替一抗作阴性对照。NOB1蛋白免疫组化染色阳性表现为细胞质内出现的黄色、棕黄色或棕褐色沉淀。根据阳性细胞所占百分比和阳性细胞的着色强度，用半定量免疫评分法对实验结果进行判定:(1)着色强度:无着色为0分，淡黄色为1分;棕黄色计2分;棕褐色计3分。(2)阳性细胞数在计数细胞中所占百分比:阳性细胞≤25%为1分，26%～50%为2分，51%～75%为3分，＞75%为4分。两者分值相加:0～2分为阴性，3～4分为弱阳性，≥5分为强阳性。每份标本置高倍镜下(×400)选取5个不同视野，每个视野计数200个肿瘤细胞，盲法判读，由两位高年资病理师独立观片后一起作出判断。

1.3随访:本研究采用电话随访结合主动随访;末次随访时间为2015年1月。

1.4统计学分析:应用SPSS17.0统计软件进行数据处理，计数资料的比较采用χ2检验，当某一个理论数1＜T≤5时，须对χ2进行连续性校正;患者生存率采用Kaplan-Meier法计算，并绘制生存曲线，两组生存率比较采用Log-rank检验。

2结果

2.1NOB1在不同组织中的表达:NOB1蛋白免疫组化主要表达于细胞质，呈黄色、棕黄色颗粒。在胃癌、癌旁胃组织及正常胃组织中均有不同程度的表达(图1);在胃癌组织中阳性表达率明显高于癌旁胃组织及正常胃组织(P＜0.05)。

2.2胃癌中NOB1表达与临床病理因素的关系:NOB1在胃癌组织中阳性表达与临床病理分期呈正相关，NOB1在胃癌Ⅲ、Ⅳ期组织中阳性表达率显著高于Ⅰ、Ⅱ期中阳性表达率(P＜0.05)(表2)。

2.3NOB1的表达与胃癌患者预后的关系:NOB1阳性表达者术后生存时间较阴性者明显缩短，NOB1表达与胃癌患者术后5年生存率呈负相关，Log-rank值为7.873(P＜0.05)。

3讨论

NOB1基因是酵母Nob1p基因的人类同源基因，编码412个氨基酸序列的RNA结合蛋白，该蛋白的N端含一个PIN(PilTaminoterminus)结构域，该结构域可参与核糖核酸酶功能，从而影响核糖体组装和蛋白质的合成;C端含一个ZNRD1(zincribbondomain-containing1，锌带)结构域，其在细胞周期的调节过程中发挥重要作用。NOB1通过PIN结构域参与核糖体小亚基的合成。40S核糖体小亚基的合成包括早期的核仁阶段的转录、rRNA修饰、在A2位点前体rRNA的剪切和晚期的胞质阶段在D位点前体rRNA剪切。NOB1通过PIN结构域可与小亚基20S前体rRNA结合，使核酸内切酶在前体核糖体剪切位点D剪切，促进18SRNA的成熟。NOB1表达异常导致18SRNA不能合成，20S前体rRNA堆积。核糖体合成的大量蛋白用于细胞的生长发育，NOB1异常将导致核糖体不能正确合成，从而影响细胞调控。故此认为，NOB1通过对核糖体合成的影响是参与细胞调控的主要因素。

NOB1可通过ZNRD1结构域参与细胞周期的调节。ZNRD1由1个三股的反平行片状结构和杂环构成，它是参与细胞的转录，并在转录中具有重要作用的结构域。有研究表明，ZNRD1是通过下调细胞周期素D1的表达将细胞增长阻滞于G1期，影响细胞生长和增殖。

泛素-蛋白酶体途径是细胞内蛋白质降解的重要途径之一，通过降解细胞内某些具有生物活性的蛋白质，可调节细胞的分化、增殖;选择性降解癌基因、抑癌基因的相关产物、凋亡调控蛋白等，从而调控细胞突变。26S蛋白酶体是泛素-蛋白酶体途径的重要组成部分，由一个20S的蛋白酶体和2个19S的调节蛋白(RP)组成。描绘26S蛋白酶体的合成模型:Nob1p与19SRP形成Nob1p-19SRP复合体，并在细胞核内与20S蛋白酶体前体结合，分子伴侣Ump1p被降解，19SRP与20S蛋白酶体前体紧密连接，而Nob1p进入26S蛋白酶复合体内部降解。当产生新的蛋白酶体时Nob1p的转录重新开始。因此认为，NOB1蛋白介导核内20S蛋白酶体与19SRP的连接，促进了26S蛋白酶体的成熟。NOB1的表达异常可导致泛素-蛋白酶体途径失常，降低后者对细胞分化、增殖及癌基因、抑癌基因的相关产物、凋亡调控蛋白的调控能力。NOB1在甲状腺乳头状癌、食管癌、结直肠癌、卵巢癌等多种肿瘤组织中高表达，提示NOB1与肿瘤的发生发展关系密切，但其与肿瘤临床病理特征关系并不完全相同。采用PCR和Western印迹法检测胰腺癌组织中NOB1基因mRNA及其编码蛋白的表达情况，结果发现:NOB1在胰腺癌组织中高表达，并与肿瘤大小呈正相关;而通过免疫组化检测NOB1在宫颈鳞癌中的表达情况，结果表明NOB1表达与患者肿瘤分化程度及是否淋巴结转移正相关，提示NOB1的表达与宫颈鳞癌的预后有关，有可能成为宫颈癌治疗的靶点及预后评估的重要指标。

本实验结果显示，NOB1在胃癌、癌旁胃组织及正常胃组织中出现不同程度的表达，在胃癌组织中表达明显高于在癌旁胃组织、正常胃组织中的表达，在癌旁胃组织及正常胃组织中表达无明显差异，表明NOB1表达增加可能促进了胃癌的发生。NOB1在胃癌的中的表达与肿瘤分期相关，提示NOB1可能在胃癌的侵袭、发展中发挥重要作用。通过对NOB1阳性表达率与胃癌患者随访结果进行分析发现，NOB1的表达与胃癌患者术后5年生存率呈负相关，提示NOB1表达与胃癌患者的病情进展密切相关。综上所述，NOB1不仅与胃癌的发生、侵袭关系密切，而且与预后存在一定关联;表明NOB1可能成为胃癌的新标志物，同时为胃癌的诊治提供了新思路。

作者：李志锋 陈美青 靳松 张刚 赵芝 孙同伟 单位：河北省保定市第一医院 普外科 河北省定州市人民医院 消化科