白血病合并感染时硫化氢与炎症研究范文

《海南医学院学报》2016年第4期

摘要：

目的：探讨硫化氢在急性早幼粒细胞白血病合并感染时的临床作用。方法：挑选APL合并感染住院病例30例为实验组，APL不合并感染住院病例26例为对照组；测定实验组和对照组血中的H2S、C-反应蛋白（CRP）、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)和白介素-10(IL-10)水平，比较以上指标在两组之间有无统计学差异。结果：实验组血中的H2S、CRP、TNF-α和IL-1β水平明显升高，IL-10水平下降，与对照组相比有统计学意义（P<0.01）；实验组经治疗感染控制后患者血浆中的H2S、CRP、TNF-α和IL-1β水平明显下降，IL-10水平上升，与感染治疗前相比有统计学意义（P<0.01）；与对照组相比，差异无统计学意义（P>0.05）；实验组H2S与CRP、TNF-α和IL-1β呈正相关（r=0.506，r=0.609，r=0.583，P<0.01），H2S与IL-10呈负相关（r=‐0.561，P<0.01）。结论：内源性H2S参与了APL合并感染时炎症的的病理生理过程，其作用可能与CRP、TNF-α、IL-1β的作用类似，与IL-10的作用相反，是促炎作用。

关键词：

急性早幼粒细胞白血病；硫化氢；炎症

近几年来，气体信号分子H2S已在生命科学和医学科学领域成了广大学者关注和研究的热点。目前的研究已经发现H2S在人体具有重要的生理和病理生理调节作用，并与许多临床疾病的发生、发展、转归有着密切的关系［1-6］。我们的研究发现，H2S参与了急性早幼粒细胞白血病（acuteleukemia，APL）的病理生理过程，为了进一步研究H2S在急性早幼粒细胞白血病合并感染时与炎症的关系，我们设计了本实验，研究H2S在APL合并感染过程中的作用及意义。

1对象与方法

1．1病例选择及一般资料

2014－01－01－2015－5－31河北北方学院附属第一医院医院初治ApL住院病例56例。其中ApL合并感染者30例为实验组，男13例，女17例，年龄19～56岁，中位年龄37岁。ApL不合并感染者26例为对照组，男12例，女14例，年龄21～53岁，中位年龄34岁，上述所有病例均排除心脑肺等主要脏器疾病，本病的诊断及疗效判断均符合《血液病诊断及疗效标准》［7］。

1．2方法

1．2．1标本采集

病例组和对照组均在早晨抽取空腹静脉血2mL至EDTA-K2抗凝管，3000rpm离心10min后，吸血浆至EP管，置于-75℃低温冰箱，用于待测定H2S浓度。病例组经抗感染治疗后再抽血复查。对照组的血浆采集、处理方法与病例组一样。

1．2．2H2S测定方法

测定前将血清标本室温复融，3000转/分离心10分钟，取上清液检测。采用去蛋白的方法[6]。首先用不同浓度的NaHS标准液绘制标准曲线，其直线回归方程为：Y=1513.1X+2.362，r2=0.998。反应在5ml玻璃试管中完成，按序加入以下试剂：首先在玻璃试管中加入10g/L醋酸锌0.5ml，然后加入血浆标本0.1ml，振荡摇匀，再依次加入20mmol/L对苯二胺盐酸盐0.5ml和30mmol/L三氯化铁0.5ml，在室温孵育20分钟使其充分反应，再加入lml10%三氯醋酸使蛋白沉淀下来，最后加入2.5ml蒸馏水补足体积至5ml，再次充分混匀，离心机中6000转/分离心5分钟，吸出上清液，用722分光光度计在670nm波长处测其吸光度，根据绘好的H2S标准曲线计算出上清液中H2S的含量，单位:μmol/L。血清CRP、TNF-α、IL-1β和IL-10水平测定，采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法,试剂盒试剂盒购自南京建成生物工程研究所。操作严格按照试剂盒说明书进行,用酶标仪(LECANSafireAutira)在490nm处读取OD值。以上试剂盒操作步骤严格无菌操作。

1.3统计学方法

计量数据以均数±标准差（mean±SD）表示。应用SPSS16.0统计软件包进行方差齐性检验，方差齐（P＞0.10）的资料多组间比较采用单因素方差分析、两组间比较用两样本均数t检验，以P＜0.05为有统计学意义。

2结果

2.1H2S、CRP、TNF-α、IL-1β和IL-10水平在各组的比较

实验组血中的H2S、CRP、TNF-α和IL-1β水平明显升高，IL-10水平下降，与对照组相比有统计学意义（P<0.01）；实验组经治疗感染控制后患者血浆中的H2S、CRP、TNF-α和IL-1β水平明显下降，IL-10水平上升，与感染治疗前相比有统计学意义（P<0.01）；与对照组相比，差异无统计学意义（P>0.05），见附表。

2.2H2S、CRP、TNF-α、IL-1β和IL-10的相关性分析

实验组关联性分析表明，H2S与CRP、TNF-α和IL-1β呈正相关（r=0.506，r=0.609，r=0.583，P<0.01），H2S与IL-10呈负相关（r=‐0.561，P<0.01），差异均有统计学意义。

3讨论

过去人们一直认为H2S只是一种毒性气体，并且一直研究和关注的是它对机体的毒害作用，近年却发现人和动物体内也有内源性H2S的产生，并且它还是目前人类发现的第三个气体信使分子。它在体内由同型半胱氨酸、蛋氨酸、半胱氨酸等含硫的氨基酸被磷酸吡多醛-5’-磷酸依赖性酶（包括CBS、CSE）、半胱氨酸转移酶等催化产生的代谢产物。研究结果表明内源性H2S参与了感染及多种癌症的病理生理过程。我们的前期研究发现，H2S参与了急性早幼粒细胞白血病的病理生理过程，为了进一步研究H2S在急性早幼粒细胞白血病合并感染时与炎症的关系，我们设计了此实验。本研究发现在急性早幼粒细胞白血病合并感染时，血浆中的H2S浓度明显升高，经抗感染治疗后H2S浓度回降至接近对照组，说明内源性硫化氢参与了急性早幼粒细胞白血病合并感染时炎症发生发展的病理生理过程，为了进一步探索H2S在这一过程中是促炎作用还是抑炎作用，我们同时测定了几个常见的炎症因子，包括CRP、TNF-α、IL-1β和IL-10，结果我们发现H2S浓度的变化与促炎因子CRP、TNF-α和IL-1β的变化趋势一致，呈正相关，与抑炎因子IL-10的变化趋势相反，呈负相关。因此，我们推测在急性早幼粒细胞白血病合并感染时硫化氢的作用可能与促炎因子CRP、TNF-α和IL-1β是一样的，促进了炎症的发展，至于H2S通过何种通路促进了炎症的发展，需要进一步设计实验去探索。H2S对炎症的作用，付兰英的等对胰腺炎的研究显示，高浓度的硫化氢能够抑制IL-10的表达，增加TNF-α、IL-1β的表达，促进体外胰腺炎模型的发展［8］。这与我们的研究结果相一致，我们猜测，在急性早幼粒细胞白血病合并感染时硫化氢的可能通过升高促炎因子CRP、TNF-α和IL-1β的表达，抑制IL-10的表达，促进了炎症的发展。CRP是一种急性时相反应蛋白,是由肝脏合成的，在炎症反应及组织损伤时CRP会显著增高［9-10］。TNF-α是一种有着重要作用的免疫调节因子，具有促炎、抗肿瘤与自身免疫调节作用，主要由活化的巨噬细胞，NK细胞及T淋巴细胞产生。IL-1β在免疫调节及炎症进程中扮演着重要的角色，主要由活化的单核－巨噬细胞产生，主要通过调节自身免疫病和炎症相关基因的表达，诱导干扰素γ、磷脂酶A2、黏附分子、一氧化氮合酶、环氧化酶2等效应蛋白的表达。IL-10能够抑制前炎症细胞因子等细胞因子，主要Th2细胞和单核巨噬细胞产生[11]。总之，通过我们的研究，探讨了H2S在急性早幼粒细胞白血病合并感染时与炎症的关系，为阐明H2S在急性早幼粒细胞白血病合并感染时的病例生理作用奠定了实验基础。

参考文献:

7.张之南，沈悌．血液病诊断及疗效标准［M］．2版．北京：科学出版社，1998：103－121．

8.付兰英,饶春燕,赵晓晏.硫化氢对离体大鼠胰腺腺泡细胞炎症因子表达的影响[J].第三军医大学学报,2013,35(8):784-788.

9.朱丽坤,温洁新.Hs-CRP与PCT在新生儿败血症早期诊断及病情评估中的应用[J].实用医学杂志,2016,32(6):1002-1003.

10.胡银娥,代淑芳,刘扬.超敏C反应蛋白、内皮抑素在糖尿病肢端坏疽早期病变中的诊断意义[J].中国现代医学杂志,2016,26(18):39-40

作者:范凌 陈立锋 范静 张灵 郭力荣 单位:河北北方学院附属第一医院血液内科 河北北方学院基础医学院生理教研室 河北张家口市第六医院妇产科 河北张家口市第一医院肾内科和血液内科