食品微生物检测技术和方式范文

《生物技术世界杂志》2015年第四期

1免疫学的方法

在食品微生物的检测当中免疫学技术主要是建立在抗原、抗体特异性结合的反应基础上,并且以免疫放大技术为辅,利用病原体刺激生成免疫球蛋白。这种方法的优势在于不需要进行样品选择性增菌之后分离,就可直接进行筛选,具备了灵敏度高的特点,按照检测方法的差异可以分为凝集反应、免疫扩散反应和免疫荧光反应等。

1.1凝集反应凝集反应从本质上来讲也是利用抗原、抗体相结合的原理,将特异性抗体包被于乳胶颗粒之上,进而产生了肉眼可见、便于观察的凝集反应。这种方法因其特异性需要获得较纯的细菌培养物,然后使培养物和致敏乳胶发生反应,通常应用于大肠杆菌类细菌中H7和O157的鉴定。

1.2免疫扩散反应免疫扩散反应的本质是生成一种不溶性的抗原、抗体复合物,是将抗体放入固体或者液体的培养基中进行培养,生成一种肉眼可见的沉淀性物质,这种反应需要在特定培养基中进行,在实际的食品微生物检测方法中,应用了这一技术的有VIP免疫扩散的试剂条还有Salmonella1-2的TestTM,这一类产品在实际当中应用也颇为广泛。

1.3免疫荧光反应免疫荧光学反应的本质是一种免疫学标记技术,利用荧光素对检测抗原或者抗体进行标记,而后产生的特异性抗原反应能够形成带有荧光的抗原、抗体结合物,在仪器中得到检验。这种方法在实际应用的过程中按情况不同可以分为直接方法和间接方法。直接方法就是直接在检测的样品上滴加已知特异性的荧光标记抗血清,在洗涤之后进行观察。间接方法就是将细菌特异性抗体上滴加在检测样本上,经过反应后再洗涤,然后加入荧光标记第二抗体,实现检测。这种方法因其荧光性更加有利于观察,也因其特异性主要适用于沙门氏菌、葡萄球菌、李斯特菌以及单核细胞增生的李斯特氏菌等方面的检测。

2分子生物学法

2.1聚合酶链式反应技术聚合酶链式反应技术是一种体外的选择性DNA或RNA扩增技术。其根本目的就是将人工无法培养出的微生物进行相应DNA或者RNA的片段扩增,通过检测扩增产物的含量来快速检测饲料当中存在的致病菌含量。聚合酶链式反应技术简称为PCR,可以直接对样品当中的肉毒梭菌、大肠杆菌、乳酸杆菌和痢疾杆菌进行检测,PCR能够克服核酸定量敏感性低的缺点,分析出极为微量的DNA,对任何模板的标本都能够实现定量扩增及分析。聚合酶链式反应技术克服了基因探针技术灵敏度不高的缺陷,其中引入的Taq聚合酶还能够简化反应程序,实现半自动化。以同位素标记基因探针的PCR反应为例,这种方法应用于水源E.Coli的检测,能够使检测量达到100%,能够快速检验出食品当中带有污染的病原,并能够保证其准确性。美国杜邦快利康公司已经建立了BAX+病原菌的检测系统,PCR技术在细菌检测方面的应用前景十分广阔。

2.2核酸探针技术核酸探针本身是一种带标记的DNA特异性片段,核酸探针技术的原理是利用碱基互补的原则,使核酸探针和目的DNA进行杂交,最终以特定方法进行标记物测定,核算探针技术大致可以分为非放射性标记和放射性标记两大类。核酸探针具有特异性。传统的检测方法都是以基因表达产物为检测目标,会受到多种因素的干扰,检测病毒要在组织培养之后对蛋白质的囊膜进行检测,还须采取超低温的保存技术,但仍然会因其一些编码蛋白的基因变化,核算探针则避免了这一复杂的程序,无需改变目的蛋白质的结构,更方便应用。但是要注意这其中要将RNA除外,因为RNA探针不耐受碱处理,需要采取不同的方法来制备出检测用的RNA。核酸探针特异性主要取决于使用条件和碱基序列,还会受到探针长度的影响,其敏感性主要受标记系统和探针本身的控制,延长培养的时间也能够提高探针灵敏度。在当前的核酸探针应用过程中还存在一些问题,要实现更快更简洁的制备还需要一段时间的研究和探讨,逐步克服因待检菌种繁多而产生的核酸探针制备问题,突破局限性。

3结语

食品安全问题不仅影响到全人类的健康,还关系到国家的发展和稳定。近年来基因芯片技术和自动微生物测定系统的兴起,进一步推动了社会发展和科技进步,将从根本上变革微生物检测方法和技术,食品微生物的技术检验定会随着手段的提高和方法的更新逐步迈向更高标准、更高效率和更高精度的层面,为人类食品安全和营养健康保驾护航。

作者：张叶叶单位：包头轻工职业技术学院