抗生素对食用菌种组织分离的影响范文

《四川农业科技杂志》2014年第九期

一、培养基配制

1.培养基配方一般食用菌组织分离使用马铃薯培养基（PDA），马铃薯200g、蔗糖20g、琼脂20g、水1000mL。2.培养基制作以1000mL培养基计算，先将马铃薯洗净去皮（挖去芽眼）切成小粒，称取200g，加水1000mL，煮沸15～20分钟，用4层纱布过滤，取其滤液并补足水至1000mL，加入琼脂20g，再加热，琼脂溶化后，再加入其它药品。培养基的分装，应在培养基凝固前进行（琼脂培养基40℃凝固）用大号注射器分装，装入量为试管长度1/4，装好后塞上棉塞，用线绳捆扎起来，棉塞部分用报纸包扎。3.培养基灭菌将试管直立放入高压蒸气灭菌锅，在0.11MPa/cm2压力下（锅入温度达121℃），生活压力锅开始放气计时，灭菌30～35分钟，待压力降到0时，慢慢放出锅内气体，趁培养基没有凝固时，将试管摆成斜面。

二、菇体选择

根据生产菌种的需要，选择符合要求的菇体。制作生产用菌种则选择符合品种特性，生长健壮，无病无虫，6～8成熟的的菇体作为分离材料；优良变异单株选择，则选择符合栽培目的，有明显优势的变异单株菇体作为分离材料。

三、组织分离培养

1.接种环境消毒不论用接种箱或超净工作台接种，在接种前，需对接种箱或接种室用0.2%的来苏水或漂白粉进行消毒处理，然后将灭菌过的组织分离材料放在箱内，福尔马林对接种箱消毒，用20mL福尔马林加入10g高锰酸钾加入罐头瓶密闭薰蒸消毒；烟雾剂接种室消毒，一间房需点燃3盒50g规格烟雾剂；接种箱消毒每次用4g。熏蒸时间30分钟。2.组织分离培养熏蒸结束，在接种箱内，用75%酒精对双手、小刀、菇体、青霉素、链霉素、小刀、镊子、接种针、打火机、罐头瓶、一次性注射器（10mL带针）进行表面消毒；用一次性注射器抽取链霉素溶液注入青霉素瓶摇匀，去掉瓶盖待用（无需考虑抗生素的剂量）。点燃酒精灯，全部在酒精灯火焰上方操作，小刀、接种针在火焰上烧一下使用。然后用小刀去掉菇盖和菇体表面组织，取菌柄和菌盖交界绿豆大小的内部菇体组织，用钩状接种针勾住迅速放入青链霉素溶液并立即取出，轻抖掉多余药液，接入培养基中间部位，轻压使其接触培养基，塞好棉塞，试管倾斜成30℃左右放置，让多余药液自然流出，防止出现水渍现象，在25℃下培养。菌种培养按品种要求进行，培养过程中勤检查，发现感染立即剔除。

四、转管培养

培养基制作、接种环境和器材消毒同上，当菌丝长到5cm时进行转管培养，选择菌丝生长健壮，无杂菌感染的母种进行转管培养。转管时，首先去除前端菌丝生长较稀弱和没有菌丝培养基，勾取菌丝较浓密的黄豆大小菌种块转接到新的试管培养基上进行培养，分离组织前后各1cm的菌种去掉不用，防止组织块中有被抗生素抑制的细菌复活感染菌种，尾端菌种同前端一样处理，去除菌丝生长较稀弱和没有菌丝培养基。转管培养不需考虑扩繁数量，只保证菌种质量。组织分离获得的菌种经出菇试验合格后用于生产。

五、母种保存

转管培养的菌种在基本长满试管斜面时停止培养，放置于0℃以上低温进行母种保存，一般2～3个月左右视进行一次转管。以上技术措施的关键：母种培养基灭菌要彻底；分离组织蘸取青链霉素合剂抑制细菌；分离组织蘸取药液动作要快，不能水渍；分离组织周围的菌种不能使用，防止被抑制的杂菌复活感染菌种。

作者：袁华军单位：四川省双流县彭镇农业综合服务站