木瓜中齐墩果酸提取技术探讨范文

《粮食与食品工业杂志》2014年第五期

1方法

1．1标准溶液的配制称取齐墩果酸标准品8．0mg，用无水乙醇溶解并定容至10．0mL，分别制成0．8mg／mL的母液，置4℃冰箱中保存。用母液依次配置浓度为0．05、0．10、0．20、0．40、0．80mg／mL的标准溶液。

1．3．2齐墩果酸得率的计算供试样进样得到齐墩果酸峰面积，由回归方程计算其百分含量，用齐墩果酸的得率来衡量原料提取效果。

1．3齐墩果酸的提取称取粉碎过筛的60目木瓜粉20．00g，按照料液比为1∶10（w／v）分别加入溶剂，混合均匀后，加入到压力反应釜中，开启搅拌，反应完成后于真空旋转蒸发器上回收有机溶剂，浓缩样品，即为齐墩果酸粗品。考察不同溶剂种类（甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯）、提取温度（20℃、30℃、40℃、50℃、60℃、70℃、80℃、90℃）、提取时间（0．5、l．0、2．0、3．0、4．0h）对齐墩果酸得率（OA得率）的影响。

1．4齐墩果酸的纯化将制备得到的齐墩果酸粗品，分别添加无水甲醇配置成0．1g／100mL，1g／100mL及1．5g／100mL并升温至60℃溶解（黄褐色液体），同时添加总质量1％的活性炭于60℃脱色，真空过滤后得到无色液体，分别在0℃～30℃下结晶，重复结晶后即可得到较为纯净的齐墩果酸。考察提取纯度与得率的影响。

2结果与讨论

2．1标准曲线的绘制由图1可以看出，齐墩果酸标准溶液配成浓度为0．05～0．80mg／mL时，表现出较好的线性关系，此时的回归方程为Y＝2×10－8X＋0．0151，此时R＝0．9998，其中齐墩果酸检测限最低位为5ng。

2．2齐墩果酸提取条件的研究

2．2．1不同溶剂对齐墩果酸得率的影响准确称取粉碎过筛的60目木瓜粉20g，在50℃下浸提3h，料液比为1∶10（w／v），为保证最大提取率所以提取3次，提取溶剂依次为甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯，过滤浸提液，于真空旋转蒸发器上回收有机溶剂，浓缩样品，用溶剂定容样品至100mL。由图2可知，甲醇提取得率最高，其次是丙酮乙醇，最差是乙酸乙酯，因此可以选择甲醇作为提取溶剂。

2．2．2不同提取温度对齐墩果酸得率的影响选用甲醇作为提取剂，准确称取粉碎过筛的60目木瓜粉20g，用甲醇浸提3h，料液比为1∶10（w／v），提取l次。由于甲醇沸点仅为64．5℃，可以通过加压来提升甲醇沸点，加压气体可选择氮气，压力选择参见表1。不同提取温度齐墩果酸得率的影响见图3。由图3可知，由于甲醇沸点仅为64．5℃，越接近沸点，对设备要求较高，同时得率有所降低，因此最佳提取温度选择50℃。

2．2．3不同提取时间对齐墩果酸的得率影响准确称取粉碎过筛的60目木瓜粉20g，用甲醇在50℃下提取，料液比为1∶10（w／v），提取l次，不同提取时间对齐墩果酸的得率影响见图4。由图4可知，2h以内齐墩果酸的得率随着时间的延长逐渐增加，而2h后，得率趋稳，因此最佳提取时间选择2h。

2．3齐墩果酸纯化条件的研究

2．3．1不同结晶温度对齐墩果酸纯度和得率的影响由表2、图5、图6可知，样品纯度随着温度升高逐渐提高（杂峰逐渐减少），但得率逐渐降低，可能温度越低其它类型杂质同样析出，超过30℃，无晶体析出；综合考虑结晶纯度和得率，且温度不易控制，在室温下操作较方便，选择15℃较合适。

2．3．2不同齐墩果酸粗品浓度对齐墩果酸纯度和得率的影响分别考察0．1、1．0、1．5g／100mL齐墩果酸粗品浓度对齐墩果酸纯度和得率的影响。齐墩果酸纯度分别为82％、73％、62％，但粗品浓度越低费时长。据实验结果，综合选择齐墩果酸粗品浓度为1g／100mL，此时得到齐墩果酸结晶的纯度较高，结晶所需时间较短。

2．3．3结晶次数的选择结晶次数选择可以根据HPLC来衡量，结晶次数对齐墩果酸纯度和得率的影响见表3，3次结晶后的图谱见图7。由图7可看出，多次结晶可以有效分离纯化齐墩果酸，但是重结晶后留在溶液中的少部分，因浓度太低不易再结晶，可以考虑结合柱层析来继续纯化。

2．4齐墩果酸红外光谱如图8所示，根据红外光谱中1245～1330cm－1、1335～1392cm－1两个区域中碳氢吸收的数目，即在前一区域有3个吸收峰，而在后一区域有2个吸收峰，判断其骨架结构类型为齐墩果酸烷型。

3结论

（1）采用无水甲醇作为溶剂对木瓜中齐墩果酸进行提取，在50℃条件下提取时间2h，齐墩果酸得率约52％。（2）齐墩果酸纯化时，在4℃结晶时纯度最低，得率最大；20℃结晶时纯度最高，得率较低。综合考虑纯度及得率，选择在室温15℃下进行结晶。（3）重复结晶3次后能够得到较为纯净的齐墩果酸样品，采用红外光谱辅助结构鉴定，根据官能团的吸收峰来判断，与文献报道的解释接近。

作者：郭涛单位：丰益（上海）生物技术研发中心有限公司