高效液相色谱法测定川木通范文

《中国药典》2005版收载川木通为毛茛科植物小木通ClematisarmandiiFranch.或绣球藤ClematismontanaBuch.-Ham.的干燥藤茎。川木通具有清热利尿、通经下乳之功效，主治水肿、小便不利与经闭乳少等症，是常用中药材［1］。《中国药典》规定以齐墩果酸作为川木通薄层鉴别的特征性成分。在我们以往的研究中，按《中国药典》方法实验，结果表明9批川木通均不含此成分，但在薄层色谱上显示出一紫红色共同斑点［2］。经过成分分离、鉴定，从小木通的茎中分离得到4个化合物，其结构分别鉴定为9,12-Octadecadienoicacid(z.z)-2,3-dihydroxypropylester、麦角甾醇、豆甾醇和β-谷甾醇，并用TLC图谱比对分析证明上述薄层色谱上显示的紫红色共同斑点为麦角甾醇、豆甾醇、β-谷甾醇的混合物。通过HPLC和TLC比对，采集的9批不同产地小木通和一批绣球藤中也含有豆甾醇。为控制川木通药材质量，笔者建立了HPLC法测定川木通中豆甾醇的含量。

1仪器与试药

高效液相色谱仪：岛津LC-10ATvp高效液相仪，SPD-10Avp紫外检测器，HW-2000色谱工作站；SartoriusBP211D电子分析天平（德国塞多利斯），JA2002N电子分析天平。

对照品：豆甾醇（实验室自制，mp、UV、IR、EI-MS、13C-NMR等数据与文献值一致［3］，含量99.8％）；小木通、绣球藤药材采集自四川省崇州市、重庆南川，四川汶川、彭州、洪雅、天全、都江堰、峨眉和康定等地，由四川省中药研究所生药室方清茂副研究员鉴定；甲醇为色谱纯，水为二次重蒸水。

2方法与结果

2.1色谱条件色谱柱为DiamonsilC18柱（4.6mm×150mm，5μm，迪马公司）；流动相为甲醇-水（97∶3）；检测波长为210nm；流速1.0ml·min-1；柱温30℃；进样量5μl；分离度大于1.5。见图1～2。

图1豆甾醇的HPLC图（略）

图2川木通样品的HPLC图（略）

2.2对照品溶液的制备取豆甾醇对照品适量，精密称定，置1ml量瓶中，加甲醇-氯仿（1∶1）溶解并稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液（1.835mg·L-1）。

2.3供试品溶液的制备取川木通生药约2g，精密称定重量，用20ml氯仿回流提取2次，1h/次，放冷，滤过，合并滤液，蒸干，残渣用甲醇-氯仿（1∶1）溶解并稀释成1ml，摇匀，即得。

2.4线性关系实验取对照品溶液，按上述色谱条件分别进样1，3，5，7，10μl，以峰面积为纵坐标（Y），以对照品进样量为横坐标（X），得回归曲线方程：Y=39476X+26684，r=0.9999。结果表明豆甾醇进样量在1.835～18.35μg范围内与峰面积积分值具有良好的线性关系。

2.5精密度实验取同一批号供试品，按“2.3”法制备供试品溶液。按上述色谱条件连续进样5次，测得峰面积RSD=0.3%，(n=5)。

2.6重复性实验按样品测定方法，对同一批川木通药材进行5次平行实验，计算其平均含量为0.27mg·g-1，RSD=0.6%。

2.7稳定性实验取同一批号供试品，按“2.3”项下法制备供试品溶液，每2h进样1次，重复5次，RSD=0.7%，说明供试品在8h内稳定性良好。

2.8加样回收率实验称3份同一批号已知含量的供试品2g，分别加入0.4，0.5，0.6ml浓度为1.944mg·ml-1的对照品溶液配成低，中，高3个浓度进行实验测定，平行测定3次，测得平均回收率分别为101.1%，101.0％，103.6％，RSD分别为1.3％，2.1％，0.7％。

2.9样品测定取不同产地供试品各3份，按“2.3”项下法制备供试品溶液。照上述色谱条件分别进样，测定。结果见表1。

表1川木通中豆甾醇的含量测定结果（略）

3讨论

本实验分别采用不同比例甲醇-水（95∶5，96∶4，97∶3）为流动相实验，结果表明以甲醇-水（97∶3）为流动相时豆甾醇的峰形和出峰时间最佳。此条件下，方法的可靠性高，准确性和重复性好，适用于川木通药材中豆甾醇的含量测定。