注射用培丙酯细菌内毒素检查范文

【摘要】目的：建立注射用培丙酯细菌内毒素检查方法。方法：通过对鲎试剂标示灵敏度（∧）的复核，以及样品细菌内毒素限值（L）的确定，样品的干扰试验，从而运用鲎试剂对样品中的细菌内毒素进行检测。结果：3批注射用培丙酯稀释至1.43mg·ml－1时对细菌内毒素检查有明显的干扰作用，而稀释至0.71mg·ml－1时则没有干扰作用。结论：可建立注射用培丙酯细菌内毒素检查法，从而代替家兔热原法来控制注射用培丙酯的质量。

【关键词】注射用培丙酯细菌内毒素鲎试剂

【Abstract】Objective:ToexplorethefeasibilityofbacterialendotoxinstestforPropylgallateForInjection（PFI）.Methods:Bycountercheckingthe∧ofLimulusAmebcyteLysateanddeterminingtheLoftheshowpieceofthebacterialendotoxins,interferencetestoftheshowpiece,wedecidetousethelimulustesttocheckthebacterialendotoxinsoftheshowpieces.Results:Afterdilutedto1.43mg·ml－1,threebatchesofPFIobviouslyinterferedwiththetestforbacterialendotoxins,whilenotattheconcentrationof0.7mg·ml－1.Conclusion:TachypieusamebocytelysatetestprovidesanewwaytodetectthebacterialendotoxinsinPFI,insteadofusingtherabbitwayforcheckingtheshowpiece,samplescanbedilutedto0.71mg·ml－1toavoidtheirinterferenceeffectsonroutinedetectionofbacterialendotoxins.

【KeyWords】PropylgallateForInjectionBacterialendotoxinsLimulustest

自从20世纪60年代阐明鲎血凝集的机制并由此建立鲎试验方法学以来，世界各国越来越多的以细菌内毒素检查药品生物制品中的致热物质来替代兔法热原检查以控制药品质量，避免家兔法热原检查中因兔子个体差异而造成的检查中的误差，从而提高实验结果的准确性。注射用培丙酯（PropylgallateForInjectionPFI）具有抑制TXA2（血栓素A2）引起的血小板聚集作用，临床用于预防与治疗脑血栓、冠心病以及外科手术后的并发症——血栓性深静脉炎等。对PFI进行细菌内毒素检查法的研究，为该品种由兔法热原检查改为细菌内毒素检查法提供了基础。

1材料

1.1药品与试剂批号为040208，040206，031102（60mg/瓶）的PFI由吉林市卓怡康纳制药有限公司生产；细菌内毒素国家标准品（批号为981，9000Eu·Amp－1）由中国药品生物制品检定所提供；细菌内毒素检查用水（批号已看不清，10ml·Amp－1）由中国药品生物制品检定所生产；灵敏度为0.5Eu·ml－1（批号为0302172），（批号为0309191）和0.25Eu·ml－1（批号为0312152）的普通鲎试剂由湛江安度斯生物有限公司生产。

1.2仪器旋涡振荡器（型号为IKA—MS—1）及恒温水浴系统（型号为19A，精密度为0.01℃）均由德国Julabo公司生产；实验所用的玻璃器皿经重铬酸钾浓硫酸洗液处理后再以250℃干烤2小时去除外源性的细菌内毒素。

2方法与结果

2.1鲎试剂标示灵敏度（∧）的复核按中国药典2005年版二部规定的方法复核灵敏度，结果3批鲎试剂的灵敏度均符合规定。

2.2样品细菌内毒素限值（L）的确定尚无标准规定的供试品内毒素限值，一般按以下公式确定：细菌内毒素限值L=K/M（K为人用每公斤体重每小时最大可接受的细菌内毒素剂量，非放射性药品在静脉途径给药时K值定为5Eu·kg－1·h－1；M为人用每公斤体重每小时最大可接受的药品剂量）。中国人按人均体重60Kg计算，则

因为本品需加至250～500ml生理盐水中混匀后静脉滴注，考虑到500ml生理盐水中所含有的细菌内毒素，则

2.3计算供试品最大有效稀释倍数

入：测试用鲎试剂的灵敏度标示值；C：供试品的浓度或供试品复溶后所得溶液的浓度。

2.4样品的干扰试验

将供试品稀释至84倍进行干扰试验，操作如下：向供试品中加入10mlBET水即为6mg/ml供试品溶液，再取0.5ml加3.7ml的BET水即为稀释至84倍的供试品溶液。

在制备内毒素标准溶液的同时用已稀释84倍的供试品溶液将细菌内毒素工作标准品以相同方法制备成所需浓度的含供试品的细菌内毒素溶液（2.0入，1.0入，0.5入，0.25入）。取鲎试剂36支，18支操作同鲎试剂灵敏度复核实验，另18支排成5列，其中4支（管）4列分别加入2.0入，1.0入，0.5入，0.25入的含供试品的细菌内毒素溶液，2支（管）1列加入供试品溶液，后操作同前。

表1实验结果（略）

按照中国药品检验标准操作规范（2005版）中的有关规定，取由湛江海洋生物制品厂生产的灵敏度为0.5Eu·ml－1（批号为20021022），0.25Eu·ml－1（批号为20020904），的鲎试剂，以及由湛江安度斯生物有限公司生产的灵敏度为0.5Eu·ml－1（批号为0309191），0.25Eu·ml－1（批号为0312152）的鲎试剂，分别对三个不同批号供试品84倍的稀释液进行细菌内毒素检查的干扰试验，并计算以样

品稀释液配制的细菌内毒素溶液反应终点浓度的几何平均值ET及用细菌内毒素检查用水配制的细菌内毒素溶液反应终点浓度的几何平均值ES，结果如下：（单位：Eu·ml－1）（略）

可看出当PFI稀释84倍时其ET与相应的ES相比均在0.5～2.0之间，且ES在（0.5～2.0）入之间，表明此时样品稀释液对细菌内毒素检查无干扰作用。

2.5样品中细菌内毒素的常规检查

取上述3批PFI的84倍稀释液，以灵敏度为0.5Eu·ml－1的普通鲎试剂按中国药典2000年版中的有关规定进行细菌内毒素检查，结果如下：（略）

由以上实验结果与数据可知，注射用培丙酯进行细菌内毒素检查是可行的，可建立注射用培丙酯细菌内毒素的鲎试剂检查法。

3讨论

我们根据PFI的最大临床用量确定其细菌内毒素限值为0.7Eu/mg，并应用两个厂家不同灵敏度的鲎试剂对3批PFI进行了细菌内毒素检查的干扰试验，证实样品在稀释至0.7mg·ml－1时对细菌内毒素检查无干扰作用，说明可建立该品种的细菌内毒素检查法。

【参考文献】

[1]中国药典[M]．2005．

[2]中国药品检验标准操作规范[M]．2005：287．新晨