浅析影响禽流感抗体水平测定因素范文

禽流感抗体水平测定在临床实际工作中应用广泛，结果判定快速，操作方法简单实用，利用病毒的血凝抑制试验来进行检测。因为很多因素的影响，使得试验结果不准确，无法指导生产，因此在实际操作中有可能出现的误差进行分析，以达到测定的结果准确。

1病毒的血凝抑制试验

1.1禽流感病毒具有血凝性

能凝集鸡、鸭、鹅、马属动物及羊的红细胞，对热比较敏感，对低温抵抗力较强，此病毒的血凝性不稳定，可被特异的抗血清所抑制，临床实践用血凝抑制试验来进行抗体水平测定。

1.2试验方法

根据《高致病性禽流感诊断技术》GB/TI8936-2003的操作方法进行检测，在操作时必须注意每一步、每一个细节。

2多种因素对抗体水平测定的影响

2.14单位病毒配制的准确性的影响

根据病毒的血凝价配制4单位病毒时，病毒的血凝价必须准确，做到现用现配，在抗体测定前必须做回归试验。回归试验见附表。第一步：用微量移液器在微量血凝板上于第1孔至第5孔中分别加入生理盐水25µl，第二步：换吸头吸取4单位病毒25µl加入第1孔中吹打混匀后，吸取25µl于第2孔吹打混匀后，依次倍比稀释至第4孔，吸取25µl弃去，第三步：换吸头于第1孔至第5孔中分别加入生理盐水25µl，第四步:换吸头于第1孔至第5孔中分别加入1%红细胞悬液25µl，第5孔为生理盐水对照。结果判定为第5孔为完全不凝集，第1、2孔完全凝集，第3、4孔完全不凝集，此结果判定4单位病毒配制正确。

2.2抗原的影响

抗原溶解分装后置于-20℃冷冻保存，尽量减少反复冻融次数，分批使用，加4单位病毒时必须边加边混匀。

2.3稀释液的影响

根据《高致病性禽流感诊断技术》GB/TI8936-2003进行PBS配制，pH为7.0时,红细胞沉降效果最佳。

2.4被检血清的影响

被检血清必须是淡黄色液体，无污染、无杂质、无腐败变性、无溶血、无胶冻样的物质。

2.51%红细胞悬液的影响

（1）离心时间与转速的影响：根据《高致病性禽流感诊断技术》GB/TI8936-2003进行红细胞离心，现用现配，离心时间过长，转速过快导致红细胞破裂，引起溶血。（2）红细胞配制时的影响：红细胞离心后粘稠度高，最好采用微量移液器的反向移液法配制，可确保红细胞的量否则会出现跳孔,影响试验结果。（3）红细胞浓度的影响：浓度过高，沉降点过大，血凝抑制价上升，过低，沉降点过小，血凝抑制价下降，同一批次的血清样品不能更换红细胞，边加边混匀。加入红细胞时,应从最后一孔加起,滴头避免接触孔内液体,以免影响结果,造成人为干扰。

2.6其它因素的影响

（1）微量血凝板：用96孔V型板比U型板的实验结果判定更准确。要适时更新，这样避免与滴头反复磨擦,发生判定偏差。（2）吸头：一次性使用，应及时更换避免污染。（3）微量移液器：必须规范使用，速度不要过快，加样时必须悬滴。稀释样品时不能产生气泡，吸头不要紧贴孔底，注意慢吸快打，吸头内不留液体。（4）振荡器：通过振荡器振荡可以加快抗原抗体反应,工作平稳匀速，时间不要太长或强度不要太大，否则会导致红细胞破裂。（5）实验室环境温度对结果的影响：必须控制在20~25℃，静置40min读结果。温度过高，时间过长，结果出现快，使整板无凝集现象，使得结果误判。（6）加样：加入PBS、4单位病毒和红细胞时，有时不注意把微量移液器吸头插人较深，留在管嘴外的液体也滴入孔内吸取量发生变化,所以吸头插入液面不可过深。待管嘴撤出液面后斜贴在试剂瓶的瓶壁上,淌走多余的液体防止形成液滴滴人血凝板孔中,一定要保证加量准确。同时避免吸头与血凝板孔接触，造成污染。

2.7结果判定

依据国标每一批血清样品用PBS和标准阳性血清作阴性和阳性对照,防止判定偏差。感作时间和结果判定要严格按照国标规定的要求,在PBS对照孔红细胞呈明显钮扣状沉淀到孔底时判定结果,并且阳性对照和阴性对照成立。

3总结

在试验过程中，每一步都按照操作规范认真操作，不要造成主观因素的误差影响，保证抗体效价的正确，根据滴度判定鸡群免疫状况、使用的疫苗种类、免疫方法、免后时间等,同时要注意判定是否野毒入侵，这样使鸡群保证在安全抗体水平,避免强毒感染对减少养殖业的损失有重要的指导意义。

参考文献

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[2]李凤华,张正飞,肖显悦.血凝和血凝抑制试验在家禽生产养殖中的应用、影响因素及解决方法[J].黑龙江畜牧兽医,2010.

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[4]雷莉辉.影响血凝和血凝抑制试验因素分析[J].中国畜牧兽医,2013(6).

作者：王彩霞 单位：山东畜牧兽医职业学院