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呼吸道病毒检验中免疫荧光法的应用

2019/06/20 阅读:

关键词:免疫荧光法;微生物;快速检验

目前,免疫荧光法已广泛应用于各类病毒、细菌的检测,具有较高的特异性和敏感性,且检验速度快。现将其应用于病毒种类的快速鉴别体会报告如下。

1资料与方法

1.1一般资料

检测对象为2017年1月-2018年12月本院收治的200名上呼吸道感染患者,其中男130例,女70例;年龄3~78岁,平均(56.3±2.7)岁;感染部位:喉部40例,咽部78例,鼻部95例;并发症:急性的心肌炎15例,肾炎12人例。

1.2方法

1.2.1试剂病毒检测试剂盒均采用了美国DHI公司产品,涵盖了荧光标志抗体、单克隆抗体形式的试剂盒,还有针对腺病毒、流感病毒以及副流感病毒等多种病毒的试剂盒,共计7种。

1.2.2检测方式标本的收集和处理:首先,借助负压吸引器对患者鼻、喉、咽等部位的分泌物进行提取,通常2~3ml便可,置于无菌生理盐水之中。其次,对提取物进行反复吹打后置于离心管中。第三,以500r/min离心8min,弃去上清液,用磷酸盐缓冲液对沉淀物进行洗涤并混匀,共洗涤3次,用0.5~1ml、0.01mol/L的磷酸盐缓冲盐溶液将最后一次离心的沉淀物溶解,并吹打成细胞悬液。将25μl细胞悬液点入玻片点样孔中,对点样孔进行风干,并用冷丙酮进行10min的固定。荧光染色:首先,于对照玻片样孔对应的细胞上滴加1滴相匹配的荧光抗体,约20μl,并将其置于37℃保湿盒中进行30min的孵育。将1-7号样孔中滴加相匹配的荧光标志抗体作为阴性对照;将单克隆抗体作为阳性对照;腺病毒、流感病毒等多种病毒试剂盒作为样品孔。其次,用洗涤液对细胞进行多次洗涤,然后再用蒸馏水实施洗涤,洗涤时间1min。第三,待蒸馏水充分风干后,通过玻片孔滴加封闭液,并盖好盖玻片,随后借助荧光显微镜进行观察。

1.3诊断原理和判断依据

诊断原理:如果单克隆抗体(已经被荧光标志)和对应抗原进行结合,则会构成复合物,借助荧光显微镜可以观察到绿色荧光;若没有被染色,便会被Evans蓝染成红色。判断依据:若出现绿色荧光则表示为阳性,若没有荧光则表示为阴性;若显微镜放大至200倍时,观察到超过2个荧光细胞便可断定表针检测是阳性。

2结果

200例患者中,175例检测出病毒,其中呼吸道合胞病毒25例(占14.29%),腺病毒50例(占28.57%),副流感病毒112例(占6.86%),副流感病毒211例(占6.26%),副流感病毒39例(占5.14%),流感病毒A38例(占21.71%),流感病毒B30例(占17.14%)。

3讨论

对于微生物的常规检验需要借助多层面综合指标,部分常规检验能够依靠生化反应来排除部分非病原性微生物,若此类非病原性微生物在形态层面与病原微生物较为相似,则容易发生混淆。因此,必须借助快速分离,同时需要于试验时添加别的判定指标。免疫荧光检测是临床常用的方法,现已向着自动化、器械化方向发展,如可借助脉冲激光光源、纤维荧光光度计或者是微型电脑等结合进行检测[1]。因为荧光抗体并不会使其生长繁殖遭受影响,因此待孵育一段时间后除了要对其特异性进行判定外,还应选出“荧光菌球”来作鉴定试验[2-3]。此外,借助流式分析分离器(FACS),能够快速分离1000~5000个/s,从而为后续鉴定奠定基础。但以免疫荧光行定量分析通常较为薄弱,若仅依靠目测对其特异性荧光进行估定并不可取[4]。通常借助荧光显微镜可以对免疫荧光标本带展开自动扫描,速度能够达到400步/s,距离则是0.25步。同时荧光信息可利用光电倍增管得到放大进而输入到图像识别仪当中来进行参数测定分析,如对微粒周长、图形或者是荧光光度[5-6]。本研究用免疫荧光法对上呼吸道感染患者的分泌物进行检测,通过对分泌物提取细胞,让细胞标本和相匹配的抗体间进行抗原抗体反应,来辨别相应病毒种类,结果十分准确并且较为快速。同时,此方式仅需要在2h内借助荧光显微镜、试剂盒等便可对病毒种类等展开快速鉴别,该方式较为简单并且十分廉价。总之,推动免疫荧光技术应用至微生物的快速检验当中,即便有些操作仍伴有部分问题,但相较于传统形式而言,该技术优势显著,随着其不断完善发展,将具备理想的应用价值。

参考文献

[1]曲远青,汪璐,孙梦媛.免疫荧光法检测抗核抗体在结直肠肿瘤诊断中的价值探讨[J].结直肠肛门外科,2018,24(S1):57-58.

[2]倪淑芳,钟小芬,李建青,等.直接免疫荧光法检测呼吸道病毒抗原的临床应用[J].现代医学与健康研究电子杂志,2018,2(7):32-33.

[3]翟晶晶.免疫荧光法在微生物快速检验中的应用研究[J].首都食品与医药,2018,25(6):36.

[4]樊尚荣,蒋济阳,刘小平,等.免疫荧光法检测B群链球菌方法的建立及性能评价[J].四川生理科学杂志,2016,38(4):191-195.

[5]刘典浪.免疫荧光法运用在微生物快速检验中的应用研究[J].现代诊断与治疗,2016,27(14):2666-2667.

[6]艾春英.免疫荧光法在微生物快速检验中的应用研究[J].中国现代药物应用,2014,8(8):114-115.

作者:郭丽 单位:临沂市中医医院

呼吸道病毒检验中免疫荧光法的应用

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