电针对面部神经损伤髓鞘细胞的影响范文

本文作者：张微孙运花史庆卫彭晓华杨果李瑛单位：成都中医药大学针灸推拿学院四川大学华西医学院电镜室

面神经损伤在临床上表现为面瘫，患者可出现口角歪斜、眼裂增宽、面部表情呆滞、耳后乳突区疼痛等症状。该病是临床常见病、多发病，不仅会对患者的生理功能、外貌特征和社交生活带来极大影响，还会给患者造成严重的心理负担。大量临床研究已经证实针灸治疗面瘫疗效确切［1－3］。我们在前期完成的研究［4］中，首次采用多中心大样本随机对照试验，证实了针灸治疗贝尔氏麻痹具有确切疗效，比西药治疗更具优势。在面神经损伤修复中，雪旺细胞作为周围神经的胶质细胞，其形态和功能至关重要。它包绕周围神经轴突形成髓鞘或不形成髓鞘。周围神经损伤后，损伤神经段发生Wallerian变性脱髓鞘，雪旺细胞功能发生改变，从维持髓鞘结构及轴突完整的结构细胞转变为再生支持细胞，为轴突再生提供物质基础。近年来的研究［5－8］还表明，雪旺细胞的功能十分活跃，能分泌表达多种神经因子和生物活性物质，如神经生长因子、睫状神经营养因子、脑源性神经营养因子、神经营养素－3等，防止受损神经元胞体死亡，协助形成神经内膜，促进轴突髓鞘化。因此，本课题基于前期临床研究结果，以面神经损伤兔模型为研究对象，从与面神经损伤修复密切相关的雪旺细胞入手，运用电镜观察电针刺激“地仓”“颊车”“翳风”“合谷”对面神经损伤的修复作用，探讨电针治疗面神经损伤的可能机制。

1材料与方法

1．1动物及分组选80～85d龄，体质量1．9～2．1kg且活动正常的健康成年日本大耳白兔（许可证号：SCXK［川］2008－14），由成都中医药大学动物实验中心提供。本实验严格遵循科技部2006年9月的《关于善待实验动物的指导性意见》的相关规定。动物雌雄各半，按性别、体质量用随机数字表法［9］分为空白组、假手术组、模型组和电针组，后3组又根据治疗时间分为1、2、3个疗程3个亚组，每组6只。

1．2主要试剂及仪器3％戊二醛、1％四氧化锇、丙酮（成都科龙化工试剂厂）。LeicaQwin细胞图像分析系统（德国徕卡公司），日立H－600Ⅳ型透射电镜（日本日立公司），青岛鑫升G6805－Ⅱ型电针仪（青岛鑫升实业有限公司）。

1．3造模方法1％戊巴比妥钠（5mL／kg）耳缘静脉注射麻醉动物，5％普鲁卡因2mL右侧面部局部注射。严格消毒铺巾，于右面部耳根与嘴角连线的中点瞳孔下方2cm处，正对神经干处的面颊部做一弧形切口，剪开皮肤、肌肉层，暴露头部筋膜，可见乳白色面神经，钝性分离面神经1cm，而后用特制止血钳满扣（压力约5kg）夹闭面神经5min［10－11］。结夹完毕后，用外科器械打结缝合方法在伤口的皮肤处进行缝合，伤口处用棉签外涂青霉素以预防伤口感染。假手术组仅做神经分离，不进行夹闭。造模后观察面部肌肉运动迟钝、患侧眼睑下垂距离≥1mm为造模成功。造模成功的实验兔，按照分组情况进行相应处理：电针组电针治疗，空白组、假手术组和模型组动物与电针组相同方法固定后不进行任何治疗。

1．4针刺方法穴位选择：面瘫选穴通常以阳明经穴位为主，结合文献，选取患侧“翳风”“地仓”“颊车”“合谷”，参照《实验针灸学》［12］并结合动物比较学方法定位。针刺操作：电针组大耳白兔用兔盒固定后，用0．25mm×25mm的毫针，“翳风”直刺10mm，“地仓”斜刺10mm，“颊车”斜刺10mm，“合谷”直刺5mm，接G6805－Ⅱ型电针仪，“翳风”“合谷”为一组电极，“地仓”“颊车”为另一组，频率为3Hz／60Hz，疏密波，电压1．5V，每日1次，每次30min，5d为1个疗程，疗程之间间隔2d，共治疗3个疗程。

1．5观察指标及检测方法各组动物分别按照分组于治疗第1、2、3疗程后经耳缘静脉注入空气处死，迅速切取右侧面神经0．5cm，立刻放入电镜固定液中保存至少3d，根据需要分别进行相应检测。电镜超薄切片：样品经3％戊二醛预固定，1％四氧化锇再固定，丙酮逐渐脱水，Epon812包埋，超薄切片经醋酸铀及枸橼酸铅双色染色，日立H－600Ⅳ型透射电镜观察电针促进面神经损伤修复的效应指标。面神经、雪旺细胞的形态改变：观察脱髓鞘的情况，髓鞘厚度，雪旺细胞内线粒体、内质网等变化情况，以评价损伤修复程度。采用LeicaQwin细胞图像分析系统，对3500倍电镜下随机选择的4个视野中完整髓鞘数目、髓鞘厚度进行测量。1．6统计学处理应用SPSS13．0统计软件包进行数据统计分析。实验数据以均数±标准差（x珚±s）表示，采用单因素方差分析进行多组间比较，方差齐时用LSD检验，方差不齐时用Tamhane’sT2检验。P＜0．05为差异有统计学意义。

2结果

2．1电镜下雪旺细胞及髓鞘形态的改变图1所示，空白组神经纤维髓鞘结构完整，无变性、脱髓鞘情况，雪旺细胞形态正常，细胞器丰富。模型组造模5d后神经纤维肿胀、变性、重度脱髓鞘，髓鞘出现分层，轴突萎缩变细，雪旺细胞细胞核染色不均，可见大量空泡；模型组造模12d后神经纤维肿胀，中重度脱髓鞘，轴突萎缩变细，雪旺细胞胞核染色较均匀；模型组造模19d后神经纤维肿胀，中轻度脱髓鞘，雪旺细胞胞核染色均匀，见少量细胞器。电针组治疗1个疗程后可见髓鞘结构完整包绕在轴突周围，出现有核的雪旺细胞，细胞核呈扁平状，细胞核染色均匀，包含丰富的细胞器，粗面内质网较分散，线粒体较少分布于核周区，胞质内存在神经胶质纤维细丝；电针组治疗2个疗程后可见神经纤维肿胀，中度脱髓鞘；电针组治疗3个疗程后可见神经纤维中度脱髓鞘，包含丰富的细胞器。假手术组脱髓鞘情况较模型组同期水平轻，3个疗程后髓鞘结构基本恢复，雪旺细胞形态正常。

2．2电针对面神经髓鞘个数和髓鞘厚度的影响见图2、图3。电镜形态学定量分析结果显示，第1个疗程后，模型组脱髓鞘情况严重，髓鞘完全崩解，髓鞘个数为0，假手术组髓鞘个数和厚度显著降低，与空白组比较差异有统计学意义（P＜0．01），电针组髓鞘厚度与空白组相比差异有统计学意义（P＜0．05）；第2个疗程后，电针组髓鞘厚度较模型组增大（P＜0．01）；第3个疗程后，电针组与模型组髓鞘个数和髓鞘厚度比较，差异无统计学意义（P＞0．05），假手术组神经修复基本完成，髓鞘个数及厚度与空白组比较差异无统计学意义（P＞0．05）；电针组3个亚组比较，第1个疗程神经修复效果最好。

3讨论

中医认为脉络空虚，风寒或风热之邪乘虚侵袭阳明、少阳经络，导致经气阻滞、经筋失养、筋肉纵缓不收是面瘫的主要病机。现代医学认为面瘫是茎乳孔内面神经非特异性炎性反应引起面肌瘫痪，面瘫面神经的病理变化，主要为面神经水肿，髓鞘或轴突不同程度的病理变化。临床将面瘫分为急性期、静止期、恢复期和后遗症期［13］。研究表明电针可以减轻神经纤维周围充血、水肿及神经根纤维脱髓鞘变，并且使雪旺细胞结构基本正常；而非电针组神经根纤维严重脱髓鞘变［14］。有研究提出针刺可促进髓鞘碱性蛋白（myelinbasicprotein，MBP）基因的转录，使MBP合成增加，从而促进髓鞘的再生［15］。面瘫急性期是否适合应用电针，仍是目前医学界争论的焦点。现代医学认为面瘫急性期的主要病理改变为面神经缺血、水肿，髓鞘或轴索有不同程度的变性，过早的刺激，可能会使局部组织呈持续性充血状态，加重水肿、神经炎性变，不利于面神经功能恢复［16］。另外有研究认为，面瘫早期适当的电针刺激可兴奋受损面神经，加快血液循环，使炎性渗出物得到吸收，通过改善神经冲动的传递，从而促进神经纤维的再生，使神经功能恢复［17］。有研究也表明，急性期电针对于促进面神经损伤修复具有积极意义，急性期针刺可以提高白细胞的吞噬功能，增加红细胞的数目，而进一步增强抗炎作用，及早改善受损神经的营养状况，促进炎性水肿的吸收，缩短面神经的受压时间，从而增加面瘫的恢复机率［18］。本研究发现，正常面神经纤维髓鞘结构完整，髓鞘密集，鲜见脱髓鞘情况。模型组出现不同程度的脱髓鞘情况，雪旺细胞结构不完整，细胞核染色质分布不均匀，细胞器缺失。电针治疗1个疗程后，雪旺细胞结构相对较完整，细胞器丰富，髓鞘呈现正常的结构，髓鞘化程度（髓鞘数量、厚度）明显优于模型组同期水平，提示急性期介入电针对受损面神经及雪旺细胞形态的及早修复有积极意义。针刺起效的关键，在于把握恰当、有效的刺激量，有效刺激量的大小主要取决于有效刺激强度以及刺激时间。本研究观察到，在刺激强度即穴位、波形等因素均保持不变的情况下，因疗程（刺激时间）不同，电针效应产生了显著性差异，电针疗效没有因为疗程的增加而相应提高，反而发生了因疗程增加致使疗效降低的情况，随着针刺的继续（2～3个疗程），髓鞘数量、厚度较前有所减少，神经组织形态学结果及各项指标结果反映面神经修复进程受阻，损伤持续进行，提示电针效应与刺激量大小不呈现正相关。面神经损伤严重时，神经髓鞘化程度明显下降，提示髓鞘化程度与面神经损伤程度呈负相关。急性期电针可以明显加快神经髓鞘化进程，促进受损面神经快速修复，但是电针效应与刺激量大小不呈现正相关，电针治疗需要把握“中病即止”的原则［19－20］。