电针对脊髓缺血坏死的影响范文

本文作者：霍则军牒军徐基民单位：北京大学第三医院中医科西安市第四医院骨科北京博爱医院中医科

临床上，在脊髓和主动脉瘤等手术过程中常因脊髓血管结构的破坏和脊髓水肿而导致脊髓缺血，缺血的脊髓组织血液灌注恢复后其结构和功能不但不能恢复，反而会加重原有损伤，甚至出现不可逆性脊髓神经元迟发性死亡的现象，称为脊髓缺血－再灌注损伤［1］。如何预防或减轻这种损伤一直是学者们关注的焦点。临床证实运动与作业疗法配合电针治疗能够明显改善外伤性脊髓损伤患者的独立生活能力，且能科学地提高住院效率［2］，MRI显示针灸可刺激脊髓损伤患者脊髓功能激活［3］。动物实验发现炎性反应在脊髓缺血－再灌注损伤中起着重要作用［4－5］。电针预处理可降低脊髓缺血再灌注损伤脊髓中丙二醛含量，维持超氧化物歧化酶活性，抑制脂质过氧化［6］；降低脊髓组织细胞内Ca2＋含量，防止Ca2＋超载，稳定细胞内环境［7］；以及增强热休克蛋白90在脊髓前角的表达，使神经细胞对缺血产生耐受，起到对神经细胞的保护作用［8］。本实验旨在进一步探讨针刺对脊髓缺血再灌注损伤保护作用的机制。

1材料与方法

1．1动物分组健康雄性成年新西兰家兔30只，西安交通大学医学院动物实验中心提供，动物合格证号：SCXK（陕）2007－001。体质量2～2．5kg。随机分为3组：假手术组、模型组、电针组，每组10只。自由饮水进食，12h照明，实验前禁食12h。所有实验动物的处置及处死，均按照西安交通大学医学动物伦理委员会相关规定。

1．2动物模型建立家兔用10％水合氯醛（2mL／kg）耳缘静脉注射，麻醉满意后［9］，仰卧固定于手术台上，腹部脱毛、消毒、铺无菌巾。取腹正中直切口，探查腹腔，暴露腹主动脉，钝性分离，于左肾动脉起始部远端约1cm处夹闭腹主动脉，确定钳夹点以下腹主动脉搏动完全消失后开始计时。用等渗盐水纱布覆盖切口，于阻断45min时松开动脉夹，逐层关腹。假手术组只暴露腹主动脉并钝性分离，但不夹闭，暴露45min后逐层关腹。术中严密观测动物生命体征，术后动物正常饮食。

1．3电针方法电针组在确定钳夹点以下腹主动脉搏动完全消失后，取双侧“足三里”和“曲池”穴，毫针直刺0．5cm。同侧“足三里”和“曲池”分别连以韩氏电针仪（HANS－202型），刺激强度1mA、频率2Hz，刺激时间30min。分别于术后12、24、36h再依照前法予以电针“足三里”和“曲池”穴30min，共4次。

1．4检测指标动物后肢运动功能评分：参照Tarlov评分标准［10］，分别于动物再灌注24、48h对其后肢运动功能进行评分。0分，无可察觉的后肢活动；1分，有可察觉的微弱后肢活动但无法对抗重力；2分，后肢能对抗重力但无法站立；3分，可正常站立、行走，但不能正常跳跃；4分，后肢功能完全恢复，能正常跳跃。0分和1分均视为截瘫。由两名不了解分组情况的观察者记录和评估评分，每例均测试3次，取其平均值。TNF－α、IL－6的测定：再灌注48h后，各组家兔用10％水合氯醛（2mL／kg）耳缘静脉注射麻醉，分离并取出腰段以下脊髓，置于－80℃的冰箱中保存，以备制作组织匀浆。按0．1g脊髓组织∶1mLPBS匀浆缓冲液的比例将标本匀浆，高速台式离心机（15000r／min）离心10min，取上清保存于－20℃，按照试剂盒说明书，以酶联免疫吸附法检测脊髓组织TNF－α、IL－6浓度。试剂盒由武汉博士德有限公司提供。

1．5统计学处理全部数据均采用SPSS15．0统计处理软件进行分析，数据用均数±标准差（x珚±s）表示，采用秩和检验及重复测量方差分析，P＜0．05为差异有统计学意义。

2结果

2．1各组家兔行为学变化所有动物术后2h内完全清醒，手术切口无红肿及渗出，无感染，无意外死亡。模型组动物行为学评分在不同时间点均明显低于假手术组（P＜0．05），电针组在不同时间点均高于模型组（P＜0．05），见图1。

2．2各组动物脊髓组织匀浆中TNF－α、IL－6的含量变化脊髓缺血再灌注48h后，模型组脊髓组织TNF－α和IL－6水平与假手术组比较明显升高（P＜0．05），电针后家兔脊髓组织TNF－α、IL－6水平比模型组明显降低（P＜0．05），见图2。3讨论我们的研究显示，电针能明显改善脊髓缺血再灌注损伤动物的行为学评分，说明电针对家兔脊髓缺血再灌注造成的损伤有保护作用，可以减轻再灌注损伤程度。脊髓缺血再灌注损伤的机制与脊髓缺血后局部离子环境的改变、细胞间黏附分子、TNF、IL、氧自由基介导的脂质过氧化反应、兴奋性氨基酸毒性、Ca2＋超载、细胞凋亡、一氧化氮等多种因素有关，其中炎性反应发挥了重要作用，炎性反应损伤贯穿于细胞损伤的全过程［4］。脊髓缺血再灌注后可引发组织自身炎性反应，使炎性细胞向损伤区聚集、浸润，进一步加重损伤，导致神经元死亡［7］。TNF－α主要由巨噬细胞产生，是众多细胞因子的重要启动因子，并协同放大炎性级联反应，介导中性粒细胞的聚集与黏附，加重脊髓损伤；TNF－α还具有神经元坏死与凋亡双重诱导作用，在脊髓缺血再灌注后明显升高［11－12］。IL－6是缺血再灌注损伤产生过程中的主要致炎性因子［13－14］，可以引起缺血组织水肿和神经元损伤，在脊髓缺血再灌注损伤中发挥重要作用。有实验显示［15－16］，抑制炎性反应有助于减轻脊髓缺血再灌注对脊髓组织的进一步损害。足三里、曲池是阳明经合穴，针刺合穴可以直接鼓动经气畅行，激发脏腑之气，而脏腑乃气血生化之源，脏腑气盛则气血旺，气血旺则疏通闭阻经脉之力强。已有研究表明，电针“足三里”“曲池”能有效抑制急性脑缺血再灌注大鼠TNF－α、IL－6的升高，对炎性反应有抑制作用［17］。

本实验显示，在脊髓缺血再灌注损伤48h后家兔脊髓组织中TNF－α和IL－6水平显著升高，说明脊髓缺血再灌注损伤后受损脊髓组织炎性反应增强，炎性反应引起白细胞和血管内皮细胞的紧密黏附，脊髓微循环障碍及血－脊髓屏障通透性增加，加重了脊髓损伤后缺血、水肿、炎性反应病理过程，在继发性损伤过程中起到重要作用。电针“足三里”“曲池”后，家兔脊髓组织中TNF－α和IL－6显著降低，说明电针能有效地抑制脊髓缺血再灌注后脊髓组织TNF－α、IL－6等炎性因子的释放，抑制脊髓组织炎性反应，减轻炎性反应导致的脊髓微循环障碍和缺血、水肿，这可能是电针发挥对脊髓缺血再灌注损伤保护作用的机制之一。