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儿童MP感染诊断评价

2012/08/27 阅读:

肺炎支原体(Mycoplasmapneumoniae,MP)是呼吸道感染的常见病原体,尤其是社区获得性肺炎和儿童原发性非典型肺炎的最常见病原体[1-3]。尽管MP感染后有一定特殊的临床表现和影像学改变[4,5],但有时仍很难与其他病毒或细菌感染相鉴别。本研究通过对153例MP感染患儿进行为期3个月的MP-DNA、MP-IgM检测和MP快速培养三种方法的动态检测,系统比较和评价三种方法在儿童MP感染中的临床诊断价值。

1对象与方法

1.1对象

选取2009年9月—2010年6月因MP感染入住深圳市儿童医院呼吸科的153例患儿。根据患儿的年龄,分为<3岁组和≥3岁组;根据患儿入院前病程分为<7d组和≥7d组;根据入院前是否用过大环内酯类药物分为用药组和未用药组。MP感染诊断标准参照《实用儿科学》[6]:有呼吸道感染症状;MP-DNA、MP-IgM和MP快速培养,至少1项阳性;并经阿奇霉素或红霉素治疗有效。所有患儿在入院时均检测MP-IgM、MP-DNA及快速培养MP,并分别在病程1、3个月时针对阳性结果重复检测。同时观察患儿有无发热、咳嗽等情况。所有诊断为MP感染的患儿均进行为期3周的标准治疗。

1.2方法

1.2.1MP-IgM检测采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法,严格按照试剂盒(深圳博卡生物有限公司)说明书进行操作及结果判定。

1.2.2MP-DNA检测采用PCR法,操作及结果判定严格按照MP-DNA扩增荧光检测试剂盒(中山大学达安基因股份有限公司)说明书。检测仪器为LightCycler3.5荧光定量PCR仪(瑞士Roche公司)。

1.2.3MP快速培养按MP快速鉴定培养液(陕西百盛园生物科技信息有限公司)说明书操作。培养24h后观察结果,若培养液颜色由原来的红色变为黄色则为阳性,而培养液颜色保持原来的红色不变则为阴性。

1.3统计学分析

采用SPSS13.0统计软件,率的比较采用χ2检验,P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1一般情况

共入选153例患儿,其中临床和影像学诊断为肺炎者141例,气管支气管炎12例。男79例,女74例;年龄6个月~14岁,平均(4.6±2.9)岁,≤3岁48例,>3岁105例;入院时病程2~15d,其中≤7d者102例,>7d者51例;入院前用过大环内酯类药物者82例,未用过者71例。患儿平均住院时间(7.58±2.30)d。所有患儿出院时体温已正常2~3d,咳嗽和(或)喘息等症状明显好转,影像学诊断为肺炎的141例患儿在出院前均复查胸片或胸部CT,肺炎均已基本吸收,其中71例较前明显吸收,70例仅存两肺纹理增多。

2.2患儿入院时三种方法MP感染检出率比较

患儿入院首次检测MP-DNA检出率为96%(147/153),MP-IgM为71%(108/153),MP快速培养为24%(37/153)。三种方法的检出率差异有统计学意义(χ2=175.5,P<0.05)。MP-DNA的检出率在<3岁组和≥3岁组间、不同病程组之间,及入院前是否用药组之间的差异均无统计学意义;MP-IgM检测法在病程>7d组检出率高于≤7d组,在不同病程和是否用药组间差异无统计学意义;培养法检出率在≤3岁组明显高于>3岁组(χ2=9.04,P<0.05),在不同病程组之间及是否用药组之间的差异则均无统计学意义。见表1。患儿入院时三种方法检测同时阳性者22例,MP-DNA和MP-IgM同时阳性者73例,MP-DNA和MP快速培养法同时阳性者11例,MP-IgM和MP快速培养法同时阳性者2例。6例MP-DNA阴性患儿中,有4例MP-IgM抗体阳性,2例MP快速培养法阳性。

2.3三种方法动态检测结果比较

三种方法动态检测MP感染结果见表2。MP-IgM在1个月阳性率达高峰,并持续至3个月时仍然维持高水平;MP-DNA的阳性率在病程1~3个月时有明显下降;MP快速培养则在病程1、3个月时因复检率过低,而未显示出变化。

2.4临床症状与检测结果的相关性

在病程1个月MP-DNA检测78例阳性,75例阴性。在78例阳性患儿中,有28例(36%)持续存在咳嗽;而在75例阴性患儿中16例(21%)仍有咳嗽。MP-DNA检测阳性患儿的临床症状(咳嗽和或喘息)持续阳性率高于阴性患儿,差异有统计学意义(χ2=3.959,P<0.05)。以上44例仍有持续咳嗽的患儿中,28例MP-DNA阳性者,其MP-IgM检测均为阳性,另16例MP-DNA阴性者,9例MP快速培养阳性;7例MP-IgM抗体仍为阳性。随访至3个月时,仍然有4例(3%)持续存在咳嗽,2例MP-DNA和MP-IgM检测均为阳性;另外2例MP-DNA均为阴性,但MP-IgM检测仍为阳性。有30例(20%)患儿在病程3个月随访过程中,重新出现发热和咳嗽等呼吸道感染症状,经证实有21例(70%)为非MP感染;2例再次检测MP-DNA或(和)MP快速培养,由阴性变为阳性,另外2例再次检测仍持续为阳性,并经大环内酯类药物治疗有效,证实为MP再次感染。5例再次检测虽然仍为阴性,但经大环内酯类药物治疗有效,推测可能为MP再次感染。

3讨论

MP是儿童肺炎和其他呼吸道感染的重要病原体之一。本研究结果显示,FQ-PCR法检测MP敏感率最高(96%),其次为ELISA法(71%),快速培养法的敏感率最低(24%),与国内外报道一致[7-10]。FQ-PCR法是检测MP-DNA,不管MP是否存活,只要有微量基因拷贝,就可以检测到。本研究结果提示,FQ-PCR法不受患儿年龄、病程及用药情况等多方面因素的影响,可以作为早期诊断MP感染的手段之一。大量文献表明,ELISA法检测MP-IgM,主要受患儿年龄、病程、免疫功能以及不同试剂盒等多方面的影响。但本研究表明,在各年龄组中,首次ELISA法检测MP-IgM的阳性率差异无统计学意义,考虑与住院患儿病情相对较重、外院治疗效果不佳,或本组样本数过少等有关。在病程>7d时,检测MP-IgM的阳性率明显高于≤7d组,故在高度怀疑MP感染时,ELISA检测最好在病程1周后进行或进行2次检测,以提高检出率,避免造成漏诊。大量文献表明,MP感染后其特异性IgM抗体在第2~3周达高峰,2~4个月逐渐消失,但本研究提示随访至3个月时MP-IgM阳性率仍保持较高水平。因此,ELISA法检测时只作MP定性试验不作滴度检测是不可取的,可能在某些只产生较低滴度MP-IgM的患儿中无法区分是近期感染还是既往感染,客观上容易导致过度治疗。本研究中,6例FQ-PCR检测阴性的患儿中,有4例MP-IgM阳性,提示ELISA法在一定程度上可以弥补FQ-PCR的缺陷,联合检测可以提高MP感染的检出率[11-13]。MP培养法仍然是目前诊断MP的金标准[14],传统培养法由于耗时长,一般不用于临床。快速培养法是近年来兴起的早期诊断MP感染的手段之一,但其易受多方面因素的影响。Ma等[15]认为影响MP阳性检出率的主要因素为年龄、性别和季节,尤其气候和温度是影响MP检出率的最主要因素,而检测前是否使用大环内酯类药物对检出率的影响不大,与本研究结果相似。

目前,关于MP感染后进行PCR动态检测的文献报道较少,国外曾报道使用PCR法动态检测MP感染后其MP-DNA持续携带的中位数时间为7周,个别长达7个月之久,即使足够抗生素治疗也不能缩短其携带时间[10]。本研究使用FQ-PCR动态检测MP-DNA,发现有60%以上MP患儿MP-DNA转阴时间>1个月,至3个月时DNA基本转阴,故推测MP-DNA转阴时间应该处于病程1~2个月之间,与国外研究结果相似。提示在治疗MP肺炎患儿时,使用大环内酯类抗生素疗程应该在3~4周以上。在随访至病程1个月时,仍然有78例患儿MP-DNA阳性,其中28例存在咳嗽,表明MP感染后临床症状的持续存在与MP-DNA的持续阳性可能有关,也表明部分患儿MP-DNA转阴时间明显落后于临床症状消失时间。MP感染后,患儿病情轻重差别较大,有些可自愈,有些病情凶险,为难治性肺炎支原体肺炎。目前研究表明,病情轻重主要与机体免疫反应过强、大环内酯类抗生素出现耐药、混合感染、MP不同表型以及MP数量多少等有关[14,16,17]。在本研究中,大多数患儿经大环内酯类药物正规治疗3周后基本痊愈,未遗留任何后遗症及其他并发症,个别患儿难治性MP肺炎经纤维支气管镜冲洗后也得到迅速好转。

儿童MP感染诊断评价

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