儿童MP感染诊断评价范文

肺炎支原体（Mycoplasmapneumoniae，MP）是呼吸道感染的常见病原体，尤其是社区获得性肺炎和儿童原发性非典型肺炎的最常见病原体[1－3]。尽管MP感染后有一定特殊的临床表现和影像学改变[4，5]，但有时仍很难与其他病毒或细菌感染相鉴别。本研究通过对153例MP感染患儿进行为期3个月的MP-DNA、MP-IgM检测和MP快速培养三种方法的动态检测，系统比较和评价三种方法在儿童MP感染中的临床诊断价值。

1对象与方法

1．1对象

选取2009年9月—2010年6月因MP感染入住深圳市儿童医院呼吸科的153例患儿。根据患儿的年龄，分为＜3岁组和≥3岁组；根据患儿入院前病程分为＜7d组和≥7d组；根据入院前是否用过大环内酯类药物分为用药组和未用药组。MP感染诊断标准参照《实用儿科学》[6]：有呼吸道感染症状；MP-DNA、MP-IgM和MP快速培养，至少1项阳性；并经阿奇霉素或红霉素治疗有效。所有患儿在入院时均检测MP-IgM、MP-DNA及快速培养MP，并分别在病程1、3个月时针对阳性结果重复检测。同时观察患儿有无发热、咳嗽等情况。所有诊断为MP感染的患儿均进行为期3周的标准治疗。

1．2方法

1．2．1MP-IgM检测采用酶联免疫吸附试验（ELISA）法，严格按照试剂盒（深圳博卡生物有限公司）说明书进行操作及结果判定。

1．2．2MP-DNA检测采用PCR法，操作及结果判定严格按照MP-DNA扩增荧光检测试剂盒（中山大学达安基因股份有限公司）说明书。检测仪器为LightCycler3．5荧光定量PCR仪（瑞士Roche公司）。

1．2．3MP快速培养按MP快速鉴定培养液（陕西百盛园生物科技信息有限公司）说明书操作。培养24h后观察结果，若培养液颜色由原来的红色变为黄色则为阳性，而培养液颜色保持原来的红色不变则为阴性。

1．3统计学分析

采用SPSS13．0统计软件，率的比较采用χ2检验，P＜0．05为差异有统计学意义。

2结果

2．1一般情况

共入选153例患儿，其中临床和影像学诊断为肺炎者141例，气管支气管炎12例。男79例，女74例；年龄6个月～14岁，平均（4．6±2．9）岁，≤3岁48例，＞3岁105例；入院时病程2～15d，其中≤7d者102例，＞7d者51例；入院前用过大环内酯类药物者82例，未用过者71例。患儿平均住院时间（7．58±2．30）d。所有患儿出院时体温已正常2～3d，咳嗽和（或）喘息等症状明显好转，影像学诊断为肺炎的141例患儿在出院前均复查胸片或胸部CT，肺炎均已基本吸收，其中71例较前明显吸收，70例仅存两肺纹理增多。

2．2患儿入院时三种方法MP感染检出率比较

患儿入院首次检测MP-DNA检出率为96％（147／153），MP-IgM为71％（108／153），MP快速培养为24％（37／153）。三种方法的检出率差异有统计学意义（χ2＝175．5，P＜0．05）。MP-DNA的检出率在＜3岁组和≥3岁组间、不同病程组之间，及入院前是否用药组之间的差异均无统计学意义；MP-IgM检测法在病程＞7d组检出率高于≤7d组，在不同病程和是否用药组间差异无统计学意义；培养法检出率在≤3岁组明显高于＞3岁组（χ2＝9．04，P＜0．05），在不同病程组之间及是否用药组之间的差异则均无统计学意义。见表1。患儿入院时三种方法检测同时阳性者22例，MP-DNA和MP-IgM同时阳性者73例，MP-DNA和MP快速培养法同时阳性者11例，MP-IgM和MP快速培养法同时阳性者2例。6例MP-DNA阴性患儿中，有4例MP-IgM抗体阳性，2例MP快速培养法阳性。

2．3三种方法动态检测结果比较

三种方法动态检测MP感染结果见表2。MP-IgM在1个月阳性率达高峰，并持续至3个月时仍然维持高水平；MP-DNA的阳性率在病程1～3个月时有明显下降；MP快速培养则在病程1、3个月时因复检率过低，而未显示出变化。

2．4临床症状与检测结果的相关性

在病程1个月MP-DNA检测78例阳性，75例阴性。在78例阳性患儿中，有28例（36％）持续存在咳嗽；而在75例阴性患儿中16例（21％）仍有咳嗽。MP-DNA检测阳性患儿的临床症状（咳嗽和或喘息）持续阳性率高于阴性患儿，差异有统计学意义（χ2＝3．959，P＜0．05）。以上44例仍有持续咳嗽的患儿中，28例MP-DNA阳性者，其MP-IgM检测均为阳性，另16例MP-DNA阴性者，9例MP快速培养阳性；7例MP-IgM抗体仍为阳性。随访至3个月时，仍然有4例（3％）持续存在咳嗽，2例MP-DNA和MP-IgM检测均为阳性；另外2例MP-DNA均为阴性，但MP-IgM检测仍为阳性。有30例（20％）患儿在病程3个月随访过程中，重新出现发热和咳嗽等呼吸道感染症状，经证实有21例（70％）为非MP感染；2例再次检测MP-DNA或（和）MP快速培养，由阴性变为阳性，另外2例再次检测仍持续为阳性，并经大环内酯类药物治疗有效，证实为MP再次感染。5例再次检测虽然仍为阴性，但经大环内酯类药物治疗有效，推测可能为MP再次感染。

3讨论

MP是儿童肺炎和其他呼吸道感染的重要病原体之一。本研究结果显示，FQ-PCR法检测MP敏感率最高（96％），其次为ELISA法（71％），快速培养法的敏感率最低（24％），与国内外报道一致[7－10]。FQ-PCR法是检测MP-DNA，不管MP是否存活，只要有微量基因拷贝，就可以检测到。本研究结果提示，FQ-PCR法不受患儿年龄、病程及用药情况等多方面因素的影响，可以作为早期诊断MP感染的手段之一。大量文献表明，ELISA法检测MP-IgM，主要受患儿年龄、病程、免疫功能以及不同试剂盒等多方面的影响。但本研究表明，在各年龄组中，首次ELISA法检测MP-IgM的阳性率差异无统计学意义，考虑与住院患儿病情相对较重、外院治疗效果不佳，或本组样本数过少等有关。在病程＞7d时，检测MP-IgM的阳性率明显高于≤7d组，故在高度怀疑MP感染时，ELISA检测最好在病程1周后进行或进行2次检测，以提高检出率，避免造成漏诊。大量文献表明，MP感染后其特异性IgM抗体在第2～3周达高峰，2～4个月逐渐消失，但本研究提示随访至3个月时MP-IgM阳性率仍保持较高水平。因此，ELISA法检测时只作MP定性试验不作滴度检测是不可取的，可能在某些只产生较低滴度MP-IgM的患儿中无法区分是近期感染还是既往感染，客观上容易导致过度治疗。本研究中，6例FQ-PCR检测阴性的患儿中，有4例MP-IgM阳性，提示ELISA法在一定程度上可以弥补FQ-PCR的缺陷，联合检测可以提高MP感染的检出率[11－13]。MP培养法仍然是目前诊断MP的金标准[14]，传统培养法由于耗时长，一般不用于临床。快速培养法是近年来兴起的早期诊断MP感染的手段之一，但其易受多方面因素的影响。Ma等[15]认为影响MP阳性检出率的主要因素为年龄、性别和季节，尤其气候和温度是影响MP检出率的最主要因素，而检测前是否使用大环内酯类药物对检出率的影响不大，与本研究结果相似。

目前，关于MP感染后进行PCR动态检测的文献报道较少，国外曾报道使用PCR法动态检测MP感染后其MP-DNA持续携带的中位数时间为7周，个别长达7个月之久，即使足够抗生素治疗也不能缩短其携带时间[10]。本研究使用FQ-PCR动态检测MP-DNA，发现有60％以上MP患儿MP-DNA转阴时间＞1个月，至3个月时DNA基本转阴，故推测MP-DNA转阴时间应该处于病程1～2个月之间，与国外研究结果相似。提示在治疗MP肺炎患儿时，使用大环内酯类抗生素疗程应该在3～4周以上。在随访至病程1个月时，仍然有78例患儿MP-DNA阳性，其中28例存在咳嗽，表明MP感染后临床症状的持续存在与MP-DNA的持续阳性可能有关，也表明部分患儿MP-DNA转阴时间明显落后于临床症状消失时间。MP感染后，患儿病情轻重差别较大，有些可自愈，有些病情凶险，为难治性肺炎支原体肺炎。目前研究表明，病情轻重主要与机体免疫反应过强、大环内酯类抗生素出现耐药、混合感染、MP不同表型以及MP数量多少等有关[14，16，17]。在本研究中，大多数患儿经大环内酯类药物正规治疗3周后基本痊愈，未遗留任何后遗症及其他并发症，个别患儿难治性MP肺炎经纤维支气管镜冲洗后也得到迅速好转。