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探索滤纸在病理白片保存中的应用

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在日常病理工作中,通常需要切取大量白片用于免疫组化等相关研究,但传统玻璃白片易碎、运输不方便,导致保存不理想,而且白片制作时间过久会导致部分抗原发生衰弱降低,影响实验结果,本文经实验发现滤纸可以作为储存白片的媒介,后期能方便快速的转移到黏附载玻片上,同时能很好的保存白片抗原,现介绍如下。

1材料与方法

1.1标本随机选取定位于细胞核、细胞膜、细胞质的免疫指标各三项进行监测,以Ki67、p16、MUM1、HER2、CD10、CD99、CK7、NapsinA、Arg1作为监测指标,根据监测指标选取相应的阳性标本各10例,其中MUM1、CD99和Arg1选择标本为弱阳性标本。

1.2材料及仪器黏附载玻片、滤纸、玻片储存盒、密封袋、Leica切片机、Roche全自动免疫组化染色机。

1.3试剂Ki67一抗购自DAKO公司,HER2、p16一抗购自罗氏公司,CD10、CK7、NapsinA、CD99、MUM1一抗购自福州迈新公司,Arg1一抗购自北京中杉金桥公司。

1.4方法(1)将Ki67、p16、MUM1、HER2、CD10、CD99、CK7、NapsinA、Arg1阳性标本连续切片2张,其中1张直接行免疫组化染色作为对照组,余1张用滤纸制作白片后放入密封袋中室温存放,储存1个月后行免疫组化染色,并与对照组比较。(2)滤纸白片制作及后期转移方法:将滤纸裁剪成玻片大小,切取白片后放入漂片仪中,用滤纸捞取白片沥干水分后放在干净的纱布上,待其充分晾干后,放入密封袋中挤掉空气储存。使用时,将滤纸白片取出,将黏附白片的一面朝上放入漂片仪中,放置约15s后,用镊子将滤纸斜放入水中,此时白片即可自然脱落,然后用黏附载玻片正常捞片即可。

2结果

染色后,随机选取两名诊断医师,观察对照组与滤纸组相对应的5个不同区域并进行染色结果对比,结果显示:滤纸储存白片的染色效果与对照组比较基本一致,阳性标本抗原性保存较好,弱阳性标本抗原性也保存良好。

3讨论

病理组织蜡块属于病历资料,一般由医院保管[1],如若需要进一步研究一般由病理科提供白片,但白片在室温中存放过久,组织切片上的抗原会发生衰弱[2],对结果造成较大影响,其原因可能与白片接触空气氧化等因素有关,虽然有的病理科将白片浸入融化的石蜡以保存抗原,但此法导致切片黏附的石蜡太多太厚,脱蜡易不足,且若石蜡质量不好、杂质太多易附着在组织上影响染色结果。另外根据陈杰伟等[3]报道,随着时间的推移,玻片黏附力呈下降趋势,极易出现脱片问题,影响染色结果,因此有效保护白片的抗原性及完整性是必要的。本文采用的是普通滤纸,质地菲薄,经水浸透后晾干不变形,可以很好的作为白片载体,由于其材质本身的亲水性,对石蜡制作的白片黏附性很低,方便后期的转移。将滤纸白片储存在密封袋中,可以更好的隔绝空气等不良因素,以便更好的保存组织抗原。滤纸仅仅是作为白片的中间媒介,使用时将白片重新转移到黏附载玻片上,方便各实验室选择适合自己的玻片,降低脱片几率。与传统玻璃白片相比,滤纸白片具有质量轻和体积小的优点,这意味着在同样大小的储存盒中,可以储存更多的白片,还可以避免玻璃白片因材质导致的运输易碎等问题,具有很大的优势。病理技术标准化日益成为国际和国内病理学的发展趋势,随着医学的发展,对免疫组化染色结果的可靠性要求也越来越高[4]。免疫组化在判断肿瘤组织起源、分类及良、恶性肿瘤的鉴别方面发挥着非常重要的作用[5],是病理诊断中最常见的“武器”,因此保证病理白片的抗原质量对保证染色结果的准确性至关重要。本文使用滤纸作为白片储存的媒介,方法简单快捷,可用密封袋真空保存,抗原性保存好,对弱阳性抗原也有较好的保存效果,成本低廉,非常适合白片的暂时保存。

参考文献:

[1]陈辉,余波,章如松,等.病理会诊常见问题与对策[J].诊断病理学杂志,2017,24(1):79-80.

[2]BancroftJD,GambleM.组织学技术的理论与实践[M].6版.周小鸽,刘勇,译.北京:北京大学医学出版社,2010:414.

[3]陈杰伟,刘君,卢佳斌,等.Leica、Dako和Roche的免疫组化自动化染色平台应用体会[J].临床与实验病理学杂志,2017,33(4):465-467.

[4]刘勇,杨海玉.国际特设专家委员会建议:诊断免疫组化阳性对照标准化[J].临床与实验病理学杂志,2016,32(1):1-3.

[5]王璐.不同方式进行的EDTA抗原热修复对免疫组化结果的影响[J].诊断病理学杂志,2017,24(2):143-144

作者:付海洋 李宏 李玉军 付广明 时维平 张翔雁 史海磊 戚慧阳

探索滤纸在病理白片保存中的应用责任编辑:陈老师    阅读:人次
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