前列腺癌细胞肺论文范文

1方法与步骤

1.1LRP免疫细胞化学将PC-3、LNCaP、PC-3/Bicalutamide、LNCaP/Bicalutamide、PC-3/Bica-lu-tamide-DHT及LNCaP/Bicalutamide-DHT细胞株分别接种于盛有盖玻片的24孔板上，待细胞布满盖玻片后取出。采用4%的多聚甲醛固定液放置在温度为4℃的条件下约15min，以PBS磷酸盐缓冲液洗涤3次，室温条件下采用20%的正常羊血清孵育半小时，分别加入LRP鼠单克隆抗体IgG(1:1000)，置于温度37℃条件下2h，以PBS磷酸盐缓冲液洗涤3次，EnVision试剂置于温度37℃条件下半小时，采用显色剂DAB显色10min，以苏木精对其染色并以树脂封片；将盖玻片置于显微镜下观察，其中背景呈现紫蓝色，有阳性产物是显黄色或黄棕色，同时采用分析软件对其图像进行分析。

1.2WesternBlot检测在冰浴中采用蛋白裂解液将PC-3、LNCaP、PC-3/Bicalutamide、LNCaP/Bi-calutamide、PC-3/Bicalutamide-DHT及LNCaP/Bi-calutamide-DHT细胞裂解13min，超声破碎细胞，离心后取上清液置于-80℃保存备用。取少许上清液按照BCA试剂盒说明定量。100℃蛋白变性后冰浴5min，上样。取0.5ml上样以SDS-PAGE凝胶电泳分离细胞蛋白，至溴酚兰刚出现终止电泳转膜，将PVDF膜置于湿盒中以5%BSA/PBS液封闭2h，加入LRP鼠单克隆抗体IgG(1:1000)，置于摇床上，控制温度4℃过夜，PBS磷酸盐缓冲液洗涤15min×3次，加入兔抗鼠二抗(1:5000)，反应1h，加入AB液发光，X胶片曝光显影，放入Bio-Rad化学发光仪进行定量分析。

1.3统计学方法所有数据均以SPSS17.0统计软件进行分析，计数资料以率或构成比表示，采用χ2检验，计量资料以均数±标准差(x-±s)表示，采用t检验，以P<0.05表示差异有统计学意义。

2结果

2.1LRP表达细胞免疫结果PC-3/Bicaluta-mide、LNCaP/Bicalutamide细胞系LRP表达强度较PC-3、LNCaP显著增强(P<0.05)；经DHT诱导后，PC-3/Bicalutamide、LNCaP/Bicalutamide细胞系LRP表达强度显著增高(P<0.05)，见表1。

2.2WesternBlot结果LRP的表达在经DHT诱导后最强，对比卡鲁胺产生耐药性的细胞株表达次之，原前列腺癌细胞株表达最弱。

3讨论

前列腺癌一般在发现时已处于晚期阶段，比卡鲁胺作为一种抗雄激素类制剂，可以与表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)以及环王巴明等联合使用，可抑制前列腺癌的增殖，通过雄激素受体(AR)以及Capase-3的介导，加速癌细胞的凋亡。研究表明，比卡鲁胺在治疗前列腺癌的初始阶段可以有效的阻断雄激素与其受体的结合。药理研究发现，比卡鲁胺可显著性的抑制人前列腺癌细胞的增殖，诱导其凋亡，同时可以减少AR以及PSA(前列腺特异性抗原)的表达。但由于癌细胞本身具有一定的耐药特性，再经过14~30个月的化学药物的诱导，很容易使癌细胞的耐药性进一步增加，同时使前列腺癌由雄激素依赖型转变为非依赖型，进而失去治疗的效果。肺耐药蛋白(LRP)首次发现于肺癌中，LRP的过度表达可使卵巢浆液性癌、白血病母细胞、胃癌细胞、人鼻咽癌等多种细胞产生耐药性，抑制LRP的表达，一定程度上可以提高化疗的效果。研究表明LRP可参与药物在细胞中的囊泡运输，可使药物包裹于囊泡内从细胞核内运至核外，并通过细胞的胞吐作用将药物进一步运送至细胞外，使药物失去对癌细胞的作用。

本研究通过建立耐比卡鲁胺前列腺癌细胞，并以DHT对其诱导，采用免疫细胞化学法和WesternBlot检测LRP的表达，比较LRP在人前列腺癌细胞、耐比卡鲁胺前列腺癌细胞以及经DHT对其诱导后的癌细胞中的表达强度。结果显示雄激素可诱导耐比卡鲁胺前列腺癌细胞肺耐药蛋白(LRP)表达增强，这与蒋照辉等报道的结论一致。

作者：朱文胜谭毅杨松邹飞陈勇张洋彭拓单位：重庆三峡医药高等专科学校附属医院泌尿外科