新生儿巨细胞病毒感染的临床检测探究范文

摘要：目的探讨实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）法检测新生儿巨细胞病毒（CMV）在不同标本类型中的阳性检出率。方法选取2015年1月至2016年6月该院收治的662例疑似感染CMV的新生儿作为研究对象，根据收集标本类型的不同分为尿液组（337例）、血液组（325例）。参照CMV检测的标本要求采集标本后，按照达安基因人CMV核酸定量检测试剂盒（PCR－荧光法）说明书进行检测。结果检测结果显示，新生儿CMV感染的总阳性率为7．40％，不同标本类型CMV阳性检出率存在差异，其中尿液阳性检出率为8．9％，而血液阳性检出率则为5．85％。新生儿尿液和血液CMV阳性感染拷贝数分布呈偏态分布，数据集中在103～105，几何均数分别为3．19×104、4．75×103，两者比较差异有统计学意义（P＝0．0246）。结论临床检测新生儿CMV感染，尿液标本优于血液标本检测，其阳性检出率更高，可更好地指导临床医生用药。

关键词：新生儿；巨细胞病毒感染；实时荧光定量聚合酶链反应；阳性率

巨细胞病毒（CMV）是新生儿产后感染最常见的病原微生物之一，可导致新生儿出现黄疸、耳聋、智力障碍等症状，严重威胁新生儿的身心健康［1］。因CMV感染通常呈无症状的感染，隐密性较强，早期确诊CMV对新生儿的治疗显得尤为重要［2－4］。本研究选取本院收治的662例疑似感染CMV的新生儿作为研究对象，对其进行CMV核酸检测分析，现报道如下。

1资料与方法

1．1一般资料

回顾性研究2015年1月至2016年6月来本院就诊疑似感染CMV的新生儿患者662例。年龄0～120d，中位年龄76d。根据新生儿的患病情况，收集其尿液或血液标本，进行后续的核酸定量检测。根据收集标本类型的不同分为尿液组（337例）、血液组（325例）。

1．2仪器与试剂

CMVDNA定量检测试剂为广州达安基因股份有限公司人CMV核酸定量检测试剂盒（PCR－荧光法），所用扩增仪器为ABI7500实时荧光定量PCR仪（美国LifeTechnologies）。

1．3方法

严格按照说明书操作和PCR实验条件具体要求。PCR扩增仪扩增，根据CMV不同拷贝数的标准品（1．0×104、1．0×105、1．0×106、1．0×107）、阴性质控品及待检样本的扩增曲线，观察得出结果。

1．4统计学处理

采用GraphpadPrism软件进行统计分析，CMVDNA平均拷贝数采用几何均数（G＝nx1槡x2……xn）计算所得组间比较采用U检验。计数资料以百分数表示，采用χ2检验，以P＜0．05为差异有统计学意义。

2结果

2．1CMVDNAPCR扩增检测结果4个标准品（1．0×104、1．0×105、1．0×106、1．0×107）、代表性阳性样品（DNA拷贝数5．2×105。

2．2新生儿不同标本CMV阳性检出率以CMVDNA拷贝数≥1×103判读为阳性，结果发现，662例新生儿检出CMV49例，阳性检出率为7．40％，其中尿液标本阳性检出率为8．9％（30／337），血液标本阳性检出率为5．85％（19／325）。

2．3新生儿CMV阳性感染标本的拷贝数分布两组新生儿CMV阳性感染标本的拷贝数分布均呈右偏态分布，数据大多集中在103～105，尤以103～104段的人数最多。尿液组和血液组阳性标本CMV拷贝数的几何均数分别为3．19×104、4．75×103，两组间差异有统计学意义（P＝0．0246）。

3讨论

CMV是新生儿产后感染最常见的病原微生物之一，可在尿液、血液等广泛传播［5］。PCR扩增检测是诊断CMV的标准方法之一［6］。然而在临床检测中CMV的检出率始终不高。本研究拟采集新生儿尿液、血液等不同来源标本，采用实时荧光定量PCR检测尿液、血液样本中CMV的DNA拷贝数，探索最佳的标本选择途径，从而提高新生儿CMV的正确检出率。CMV最容易侵犯的部位是肾脏、肝胆系统的管道上皮细胞，在肾小管上皮细胞内大量复制后经尿液排出，因此尿液中CMVDNA拷贝数较高［7］。沈丹等［8］在确诊或高度怀疑为CMV性肝炎的儿童患者中，应用实时荧光定量PCR方法，检测患者血清、外周血单个核细胞及3次混合尿3种标本CMVDNA的水平，结果发现尿液标本的CMV检出率最高，定量检测结果最高。钟瑞芬等［9］采用实时荧光定量PCR和IgM抗体化学发光法两种方法分别检测新生儿尿液和血液中的CMV，结果发现尿液标本检测结果与上述结果类似。本研究采用新生儿尿液和血液标本，发现尿液CMV检出率较血液高，且拷贝数的几何均数为3．19×104，显著高于血液中CMV的拷贝数（4．75×103）一个数量级。由于新生儿的特殊性，尿液较血液更易于采集，有利于后续治疗连续采集、检测。因此，尿液是新生儿检测CMVDNA的最佳标本选择。早期使用更昔洛韦对免疫能力较强的新生儿进行抗CMV病毒治疗，可在很大程度上减轻症状、降低病死率。前期研究结果显示，CMV在感染机体后通常呈潜伏期感染，90％以上的新生儿先天性感染无任何临床症状［10］。与此同时，CMVDNA检测是确诊新生儿感染CMV的最可靠方法。因此CMVDNA检测结果的假阴性会极大地延误新生儿患者的治疗时机。本研究发现，尿液标本中CMV的阳性检出率较血液标本高，且其平均拷贝数也较血液标本高出一个数量级，可在一定程度上降低CMV检出假阴性的发生，进而有效地对临床是否采取抗病毒治疗给予指导意见。综上所述，新生儿CMV感染的阳性检出率与标本的采集途径存在一定的相关性，尿液是新生儿CMVDNA检测的最佳标本。采用尿液检测新生儿CMV的感染状况，对于临床指导CMV的抗病毒治疗，提高新生儿CMV感染的预后有很好的积极意义。

参考文献

［1］许玲芬，孙梅，毛志芹，等．婴儿巨细胞病毒肝炎临床分析及更昔洛韦疗效评价［J］．中国实用儿科杂志，2002，17（8）：472－474．

［2］邓慧玲，谢燕，符佳，等．尿巨细胞病毒－DNA定量动态监测在婴儿巨细胞病毒肝炎诊治中的临床意义［J］．现代医药卫生，2011，27（14）：2128－2129．

作者：张美娜；赵虎；李仁哲；唐敏英；吴琳；詹世淮；王庆华；谭建明 单位：福州总医院泌尿外科