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抗凝血多肽Hirulog-S的稳定性研究范文

时间:2022-02-24 09:20:18

抗凝血多肽Hirulog-S的稳定性研究

《军事医学杂志》2015年第十二期

[摘要]

目的考察抗凝血多肽Hirulog-S原料药及冻干剂的稳定性,为该药临床应用及保存条件的制定奠定基础。方法采用高效液相色谱法,通过影响因素实验、加速实验和长期稳定性实验测定Hirulog-S原料药及冻干剂的含量及有关物质的变化。结果影响因素实验结果表明,温度、湿度对Hirulog-S原料药、冻干剂的含量及有关物质变化影响不大;加速实验(40℃,RH75%)、24个月室温及4℃长期稳定性实验显示,Hirulog-S原料药及冻干剂含量及有关物质均无显著变化。结论Hirulog-S原料药及冻干剂具有较高稳定性,原料药室温避光密封保存、冻干粉4℃避光密封保存,暂定有效期2年。

[关键词]

抗凝剂;硬脂酸链修饰多肽;Hirulog-S;稳定性;色谱法,高压液相

Hirulog-S[序列:D-FPRP-GK(stearicacid)GG-QGDFEPIPEDAYDE-NH2]是本实验室设计的新型抗凝血多肽,含有修饰的硬脂酸侧链[1]。与临床药物比伐卢定(bivatrudin,Hirulog-1,D-FPRPGGGGNGDFEE-IPEEYL)相比具有显著优点[2~6]:①Hirulog-S的体内抗凝活性为现有抗凝药物比伐卢定的10倍以上,半衰期适中(3.5h,Hirulog-1为16min),且作用平缓,不造成APTT高峰,出血性小;②不良反应低,小鼠急性毒性实验表明,Hirulog-S高于有效剂量100~200倍未发现明显毒性症状,脑、脏器等未出现异常或出血现象;③1~2次/d静脉注射就可保持很高的抗凝活性,用量仅为比伐卢定的1/10,能克服比伐卢定用量大(250mg/瓶)、药物峰值浓度高、半衰期短、连续静脉注射的缺点。本研究基于前期建立的Hirulog-S质量分析方法[7]以及《中国药典》2010年版[8,9],研究其原料药、冻干剂的稳定性,为其临床应用制定保存条件。

1仪器与试剂

Agilent1200高效液相色谱系统,ChemStationB.04.02处理软件(安捷伦科技有限公司)。pH计(PE-10)、CP324S电子天平(德国Sartorius),VotexGenie1振荡器(美国ScientificIndustries),Alpha-2LD冻干机(CHRIST),SHH-GSD系列综合药品稳定性试验箱(重庆市永生实验仪器厂)。Hirulog-S对照品(批号:20100304,经HPLC峰面积归一化法计算纯度≥99.65%),新型抗凝血多肽Hirulog-S原料药样品(批号为20100301,20100302,20100303)均为成都圣诺生物制药有限公司产品;新型抗凝血多肽Hirulog-S冻干剂样品(生物工程研究所,批号为20100901、20100902、20100903,每瓶冻干剂含Hirulog-S25mg,甘露醇12.5mg,冻干前用0.5mol/L碳酸钠调节pH值至5.1~5.5)。乙腈(Fisher公司),甲醇(Honeywell公司),TFA(Acros公司,纯度为99%)均为色谱纯,磷酸和浓氨水及其他试剂均为市售分析纯,去离子水(自制)。

2方法与结果

2.1影响因素实验

2.1.1光照实验原料药(批号:20100303)及冻干剂样品(批号:20100902)置于敞口西林瓶并放入药品稳定性试验箱。冻干剂样品取2瓶,样品暴露放置于药品稳定性试验箱,光照强度5000±500LUX(温度25℃)放置10d,于第0、5、10天时取样,考察其含量及有关物质变化(水份含量及三氟乙酸含量未计,下同)。结果表明,Hirulog-S原料药对光稳定,含量及有关物质均无明显变化;Hirulog-S冻干剂的含量在第10天略有下降,有少量杂质产生,建议避光保存。

2.1.2高温实验同前取样,置于药品稳定性试验箱,分别于40、60℃放置10d,于0、5、10d时取样,考察其含量及有关物质变化。结果表明,Hirulog-S原料药在高温条件下稳定,Hirulog-S冻干剂在40℃高温条件下稳定,含量无明显变化,在60℃高温条件下含量略有下降,有少量杂质产生,结果见表2、表3。

2.1.3高湿实验同前取样,置于药品稳定性试验箱,分别于相对湿度(RH)75%、RH92.5%(温度25℃)放置10d,于0、5、10d时取样,考察其含量及有关物质变化。结果表明,Hirulog-S原料药及冻干剂在高湿条件下稳定,结果见表4、表5。

2.2加速实验3批原料药样品(批号:20100301、20100302、20100303)及3批冻干剂样品(批号:20100901、20100902、20100903)模拟上市包装,置于RH75%、40℃条件的药品稳定性试验箱中放置6个月,于第0,1,2,3,6个月取样,考察其含量及有关物质变化。结果表明,Hirulog-S原料药及冻干剂均较为稳定,6个月加速实验含量没有显著变化(表6)。

2.3长期试验3批原料药样品(批号:20100301,20100302,20100303)模拟上市包装,置于室温和4℃冰箱中避光保存,定期取样分析;3批冻干剂样品(批号:20100901,20100902,20100903)模拟上市包装,置于4℃冰箱中避光保存,定期取样分析(表7、表8)。结果表明,Hirulog-S原料药在室温及4℃条件下放置2年稳定,含量无明显变化,3年后含量略有下降;Hirulog-S冻干剂在4℃条件下放置2年稳定,含量无明显变化。

3讨论

本研究采用HPLC方法学分析Hirulog-S原料药及冻干剂样品[6],该法快速简便,结果准确可靠,重复性好。影响因素实验研究结果表明,Hirulog-S对光照、温度(40℃)及湿度稳定(吸湿除外)。6个月加速实验及长期留样考察实验表明,Hirulog-S原料药及其冻干剂针剂稳定性很好,该药原料药在室温下储存有效期达2年以上。该药冻干粉在4℃避光保存条件下有效期可达2年以上。一般来说,多肽类药物稳定性不好,需要低温保存(如4℃)。然而Hirulog-S的原料药不仅在4℃条件下长期保存十分稳定,且在室温下保存2年也十分稳定,其含量及有关物质变化与4℃保存的结果差别不大,这在多肽药物中非常少见,这一特性使其储存十分方便,减少了储存及运输成本。

【参考文献】

[1]戴秋云,黄园园,董铭心,等.一类抗凝血多肽及其用途:中国,ZL200710120685[P].2011-03-23,InternationalPCTPa-tentApplicationNumber:PCT/CN2008/001881,2010-05-20.

[2]YuZ,HuangYY,WangY,etal.Constructionandcharacteriza-tionofnovelhirulogvariantswithantithrombinandantiplateletfunctions[J].ProtPepLett,2014,21(1):69-74.

[3]MalikN,GershlickAH.Theclinicalandeconomicimpactofbivalirudinforpercutaneouscoronaryintervention[J].ExpertRevPharmacoeconOutcomesRes,2013,13(6):699-706.

[4]ScholleJM,WhiteCM.Bivalirudin:areviewofpharmacologyandtherapeuticuse[J].ConnMed,2010,74(10):595-597.

[5]张艳,韩国柱,吕莉,等.新型合成水蛭肽Hirulog-s抗家兔弥散性血管内凝血的作用[J].中国新药杂志,2012,21(6):611-615.

[6]LiuZG,YuZ,HuangYY,etal.Anovelstearicacid-modifiedhirudinpeptidomimeticwithimprovedpharmacokineticpropertiesandanticoagulantactivity[J].SciReports,2015,5:14349.

[7]郭会芹,王于,付超,等.新型抗凝血多肽Hirulog-S的质量分析[J].药物分析杂志,2011,31(10):1930-1933.

[8]国家药典委员会.中华人民共和国药典2010年版二部附录ⅤD高效液相色谱法[S].北京:中国医药科技出版社,2010:29-30.

[9]国家药典委员会.中华人民共和国药典2010年版二部附录ⅪⅩC原料药与药物制剂稳定性试验指导原则[S].北京:中国医药科技出版社,2010:199-200

作者:余硕 郭会芹 董铭心 戴秋云 单位:军事医学科学院生物工程研究所

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