种植与野生走马胎的对比范文

《广西科学院学报》2016年第3期

摘要：

【目的】为给种植走马胎入药提供科学依据，研究野生走马胎与种植走马胎的化学成分差异。【方法】采用薄层色谱法对比野生与种植走马胎的薄层色谱特征，并用分光光度法对比测定它们多糖的含量。【结果】野生与种植走马胎的薄层色谱特征和多糖含量基本一致。【结论】种植走马胎与野生走马胎的化学成分无明显差异，可代替野生走马胎入药。

关键词：

走马胎；薄层色谱；分光光度法；多糖

0引言

【研究意义】走马胎（ArdisiagigantifoliaStapf）为紫金牛科紫金牛属植物大叶紫金牛的干燥根及根茎[1]，主要分布广西、江西、广东等地。走马胎祛风湿、壮筋骨、活血祛瘀，为民间常用的跌打伤科用药。随着走马胎的开发利用，野生走马胎资源日益减少。开展人工种植、扩大药材资源对走马胎及其制剂的可持续发展具有重大意义。【前人研究进展】现有的研究表明，走马胎含有皂苷、黄酮、挥发油等多种成分[2-5]，具有显著的抗恶性肿瘤、抗炎、抗氧化等生物活性[6-12]。【本研究切入点】目前为止，尚未见野生走马胎和种植走马胎的化学成分对比研究的报道。【拟解决的关键问题】参考文献[13]，对比研究野生走马胎与种植走马胎的化学成分，为其入药提供依据。在不同展开系统下对野生和种植走马胎不同部位进行薄层色谱分析，并采用紫外分光光度法测定野生和种植走马胎中多糖的含量。

1材料与方法

1.1材料

岛津UV2550紫外可见风光光度计和高速多功能粉碎机（上海冰都电器有限公司），电子天平（梅特勒XS-205瑞士梅特勒-托利多公司），HH-S数显恒温水浴锅（金坛市医疗仪器厂），KQ-5200B型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司），电热恒温鼓风干燥箱（上海精宏实验设备有限公司），ZF-90D暗箱式紫外分析仪（上海光豪分析仪器有限公司）。野生走马胎采自广西乐业县，种植走马胎采自广西乐业县甘田镇种植基地。经广西中医药研究院何开家主任药师鉴定两者都为紫金牛科紫金牛属植物大叶紫金牛的干燥全株；D-无水葡萄糖对照品（批号：110833-201205），中国食品药品检定研究院提供，水为超纯水，其他试剂为分析纯。

1.2方法

1.2.1TLC鉴别

1.2.1.1供试品溶液的制备

将干燥的种植走马胎及野生走马胎的根茎、茎、叶部位分离并粉碎过40目筛，分别称取2g置于具塞锥形瓶中，加入甲醇20mL，静置浸泡30min，超声提取1h；0.45µm微孔滤膜滤过，取续滤液。

1.2.1.2供试品溶液的展开

在同一块G-硅胶板上，取1.2.1.1节制备的供试品点样，分别以环己烷-丙酮（2:1）、石油醚-乙酸乙酯（4:1）、正己烷-乙酸乙酯（3:1）为展开剂，预饱和10min，展开后取出晾干，分别以10％硫酸乙醇溶液显色，105℃的烘箱中烘5min，置紫外灯（365nm）下检视。

1.2.2多糖含量测定

1.2.2.1对照品溶液配制

取D-葡萄糖对照品适量，精密称定，置容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，制成每1mL含D-葡萄糖0.5mg的溶液。

1.2.2.2供试品溶液配制

取走马胎根茎粉末（40目）约5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加5倍量80%乙醇浸泡1h，回流提取2次，每次1h，弃去滤液，滤渣用15倍水回流提取1h，完全转移至100mL容量瓶，加水至刻度，摇匀，0.45µm微孔滤膜滤过，取续滤液。

1.2.2.3测定波长的选择

参照文献[14]，取供试品溶液及对照品溶液各0.5mL，加蒸馏水1.5mL，摇匀，立即加入6%的苯酚溶液1mL，摇匀，加浓硫酸5mL，于40℃水浴中保温20min，取出，置冰浴中保持15min，以相应溶剂为空白，在400~600nm范围进行光谱扫描。

2结果与分析

2.1薄层色谱鉴别

将野生走马胎与种植走马胎的根茎、茎、叶的供试品溶液点于同一薄层板上，分别在不同展开系统下展开。图1结果显示野生与种植走马胎对应部位的薄层色谱特征基本一致。

2.2多糖含量测定

2.2.1检测波长的选择

将进行显色反应后的供试品溶液及葡萄糖对照品溶液在400~600nm范围进行光谱扫描结果两种溶液在491nm处均有最大吸收(图2)，故选择491nm作为含量测定的检测波长。

2.2.2多糖含量

参照文献方法[14]，对比测定种植走马胎与野生走马胎根茎中多糖含量，结果分别为15.02mg/g、15.88mg/g。

3结论

为了全面反应种植走马胎与野生走马胎在化学成分上的差异，将根茎、茎和叶分开对比分析，但由于其药用部位是根茎，故选择对比根茎部位的多糖含量；虽然走马胎中含有多种成分[2-5]，但因药材中含量低或缺少对应的化学对照品，故本文未在薄层色谱中引入相应的对照品进行对比鉴别。薄层色谱和分光光度测定结果表明，种植走马胎与野生走马胎对应部位的薄层色谱特征及多糖含量均无明显差别，为种植走马胎代替野生走马胎入药提供了科学依据。

参考文献：

[1]广西壮族自治区壮药质量标准（第一卷）[S]．南宁：广西科学技术出版社，2008．

[2]卢文杰，王雪芬，陈家源，等．大叶紫金牛化学成分的研究[J]．华西药学杂志，1990，5(3)：136-138．

[3]封聚强，黄志雄，穆丽华，等．走马胎化学成分研究[J]．中国中药杂志，2011，36(24)：3463-3465．

[4]李群芳，娄方明，段兴丽，等．气相色谱-质谱联用法测定走马胎挥发油成分[J]．时珍国医国药，2009，20(11)：2883-2884．

[5]娄方明，李群芳，张倩茹，等．微波辅助水蒸气蒸馏走马胎挥发油的研究[J]．中药材，2010，33（5）：815-819．

[6]穆丽华，赵海霞，龚强强，等．走马胎中的三萜皂苷类成分及其体外抗肿瘤活性研究[J]．解放军药学学报，2011，27(1)：1-6．

[7]陈超，孙艳，董宪结，等．走马胎中化合物AG4对人鼻咽癌细胞裸鼠移植瘤的影响[J]．中国药物应用与监测，2015，12(1)：12-15．

[8]杨竹，黄敬辉，王乃利，等．走马胎中新的岩白菜素衍生物的提取分离及体外抗氧化活性测定[J]．沈阳药科大学学报，2008，25(1)：30-34．

[9]郑小丽，董宪器，穆丽华，等．走马胎中皂苷成分AG4对MCF-7肿瘤细胞增殖的影响及机制研究[J]．中国药理学通报，2013，29(5)：674-679．

[10]谷永杰，穆丽华，董宪喆，等．走马胎中三萜皂苷成分H1对6株肿瘤细胞增殖及对A549肺癌细胞凋亡及细胞周期的影响[J]．中国实验方剂学杂志，2014，20（10）：130-133．

[11]沈诗军，周定刚，黎德兵．走马胎提取液体内抗血栓作用研究[J]．时珍国医国药，2008，19（9）：2224-2226．

[12]唐亚平．中药走马胎治疗类风湿关节炎的临床观察[J]．四川中医，2007，25（1）：54-55．

[13]陈赤，何开家，刘布鸣，等．野生与野生抚育猫爪草药材的分析比较研究[J]．广西科学，2008，15(1)：70-74．

[14]戴敏，周凌云．走马胎多糖含量测定及其提取工艺初步研究[J]．中国药业，2014，23(19)：47-48．

作者:龙杰超 冯军 刘布鸣 何开家 陈明生 单位:广西中医药研究院 广西中药质量标准研究重点实验室