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菌类生长的生物学特征

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作者:高玉海许慧春邓俭姜俊清赵绥林何秉章单位:黑龙江大学伊春分校伊春南岔林业局伊春林业学校东北林业大学哈尔滨园林研究所东北林业大学

苦白蹄〔Laricifomesofficinalis(Vill.exFr.)KotlabaetPouzar〕(别名药用拟层孔菌、奎宁菌、落叶松层孔菌)广泛分布于北温带。在俄罗斯和中国危害落叶松(Larixspp.),引起落叶松立木和木材的褐色腐朽。在欧洲和美洲,还可危害冷杉(Abeis)、云杉(Picea)和多种松树(Pinus)〔1,2〕。该菌在前苏联民间用于治疗胃病,甚有特效。

在欧洲和日本,可治疗腹痛、感冒、肺结核盗汗、毒蛇咬伤、慢性支气管炎等,有的作茶饮用。近年来报道,该菌具有抗癌作用〔3,4〕。

对该菌的分类位置,有过几次报道,但对该菌的生物学特性的研究报道甚少,为了进一步开发利用该菌种和防治该菌引起的病害,对其生物学特性进行了研究。

1材料

1.1菌种来源采自大兴安岭落叶松立木上的苦白蹄子实体,经鉴定为苦白蹄。

1.2菌种纯化

在无菌操作条件下,切取菌体内部黄豆粒大小菌肉组织接种于PDA培养基上,25e培养5d后,从菌落边缘挑取菌丝再转管,反复3次,可获纯菌

2实验方法和结果

2.1不同培养基对菌丝生长的影响配制4种适于真菌生长的培养基,培养基种类及配方见表1,分别接种同质等量菌丝放于25e温箱中培养,每24h测量一次,并记录(见表2),且根据每日记录结果绘制菌丝生长曲线图(见图1)。由以上结果可以看出,苦白蹄可以在上述四种培养基上生长,但以PDA、落PDA生长较好,PDA培养基上日均生长量为0.7mm,落PDA培养基上日均生长量为0.9mm。在麦芽糖培养基上生长比较稀疏。

2.2不同温度对菌丝生长的影响将菌种接于培养皿中PDA培养基上,在不同温度条件下避光培养,设5、10、15、20、25、30°6个梯度,每梯度3个重复,每24h测量一次,并记录(见表3),且根据每日记录结果绘制生长曲线图(见图2)。从以上结果可以看出,苦白蹄可以在10~30e培养基上生长,但以20e和25e生长较好,菌丝致密,日均生长量分别为1.6mm和1.5mm,说明此菌为喜温菌。

2.3光照对菌丝生长的影响将接种的培养基分别置于有光、半光、无光的条件下,温度均为25°,每24h测量一次,并记录(见表4、图3)。从以上结果可以看出,苦白蹄在全光、半光、无光条件下均可生长,但以无光条件下生长最佳,无光培养基上日均生长量为0.9mm。

2.4不同pH值对菌丝生长的影响

2.4.1缓冲液的配制先配制0.2mol/LNa2HPO3#2H2O和0.1mol/L柠檬酸,用二者适量混合配成3、4、5、6、7、8等6个pH值梯度。

2.4.2落PDA培养基做好后,用HCl和NaOH溶液把pH值调至7。

2.4.3将上述缓冲液和培养基高压灭菌。

2.4.4在无菌条件下倒平板后,立即用一胶头滴管吸1ml对应缓冲液滴入其中,轻轻摇匀,静置冷却。

2.4.5接种,每梯度3个重复,每24h测量一次,并记录(见表5)。由上述实验结果可以看出,在pH3~8的条件下,菌丝均可以生长,但以pH3~6生长较好,日均生长量均为1.0mm。说明此菌对pH值的要求不严格,在各种pH值下差别不大。

2.5不同C源对菌丝生长的影响

在下面的各项试验中,均用Lilly和Barnett半组合培养基〔5,6〕。培养基配方见表6。将表6中列出的C源和维生素在距离紫外灯下8cm处铺成薄层,用紫外灯照射60min灭菌,维生素灭菌后配成原液使用。磷酸盐用200ml蒸馏水溶解后高压灭菌。其它物质溶入800ml蒸馏水中高压灭菌,最后这些成分在无菌的条件下混合。培养基灭菌后,用1mol/L的盐酸和1mol/L的NaOH调节pH值至6。在半组合培养基中,固定N源(天冬素),分别以不同C源进行培养,每种处理3个重复,每隔24h测量一次菌丝生长半径,并记录(见表7)。由上述结果表明,该菌对C源的要求并不十分严格,除乳糖、麦芽糖以外,生长均较好,但以萄萄糖、果糖最佳。

2.6不同N源对菌丝生长的影响

固定C源(萄萄糖),分别用不同的N源进行培养,基本方法同上,每24h测量一次,并记录。结果见表8。由上述结果表明,该菌对N源的要求不严格,其中以甘氨酸生长较佳,可作为其生长的最佳N源。

2.7微量元素对菌丝生长的影响

在C、N源(葡萄糖和酒石酸胺)固定下,分别缺少钾、镁、铁、锌、锰离子,然后与正常生长的对照菌落进行比较(见表9)。从表9中看出,缺K+及Mg2+生长较差,说明该菌对K+、Mg2+等的要求比较严格。

2.8维生素VB1对菌丝生长的影响

由上述结果表明,维生素VB1对该菌生长影响不大,有维生素VB1生长较好。

3结论

3.1苦白蹄在落PDA培养基上生长最佳。

3.2苦白蹄在10~30e都能生长,在此温度区间中生长量与温度成正比,最适温度为20e。

3.3光照对苦白蹄生长影响极大,生长量与光量成反比,无光时生长最快。

3.4此菌在pH3~8均能生长,最适生长pH值为3~4。

3.5在庶糖、麦芽糖、葡萄糖、乳糖、果糖、无糖的基质上培养,除乳糖、麦芽糖生长较差外,其余生长较好,最佳C源是葡萄糖。

3.6在所实验的N源上均生长较好,最佳N源为甘氨酸。

3.7此菌在缺少锰、锌、铁离子的情况下与对照相差无几,但缺钾、镁离子的菌丝生长略受阻。

3.8在有VB1的条件下生长较好。

菌类生长的生物学特征责任编辑:陈老师    阅读:人次