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酶联免疫实验对食品分析的重要性范文

时间:2022-11-30 09:44:56

酶联免疫实验对食品分析的重要性

1实施过程及具体实验步骤

根据笔者的教学经验,该综合性实验约需教学时数,10~12学时,具体操作过程如下。

(1)带教老师讲述ELISA的原理,应用及注意事项。

(2)通过观看酶联免疫吸附实验操作视频,了解整个实验流程及操作要点。

(3)将学生分组,每组3人,开展ELISA综合实验。

(4)实验操作结束,带教老师与学生共同讨论分析实验结果。

具体的实验操作步骤如下:以测定牛奶和鱼肉中的氯霉素为例,采用酶标抗原的直接竞争法,介绍本实验具体实验步骤。

(1)包板:将抗体用包被液稀释一定的倍数,加入96孔酶标板中,100μL/孔。37℃孵育,过夜。

(2)封板:洗板两次,加入封闭液120μL/孔,37℃孵育,3小时。

(3)样品前处理:封板时,分别对样品牛奶和鸡肉进行前处理。

(4)烘干:将封闭好的板倒掉封闭液,37℃烘干。

(5)加样:加标准品/样本50μL/孔,然后加入酶标记物50μL/孔,再振荡混匀,用封板膜盖板,37℃条件下反应30min。

(6)显色:洗板4~5次,每次浸泡30s,拍干。每孔加入底物缓冲液50μL,再加底物液50μL,轻轻振荡混匀,37℃或室温环境避光显色10min。

(7)测定:每孔加入终止液50μL,轻轻振荡匀,设定酶标仪于450nm处测定吸光度值。

(8)结果判定:以标准品百分吸光率为纵坐标,以氯霉素标准品浓度(ng/mL)的半对数为横坐标,绘制标准曲线图。将样本的百分吸光率代入标准曲线中,从标准曲线上读出样本所对应的浓度,乘以其对应的稀释倍数即为样本中氯霉素实际浓度。

2结语

ELISA实验是一个综合性实验,涉及到有机化学,食品化学,生物化学以及免疫学等方面的相关知识。因此,学生通过本实验,可以取得以下效果:(1)巩固理论识,加强对相关知识的理解,并对该技术在食品安全检测领域的重要性有一定的认识。(2)结合视频及具体实验操作,了解整个实验的操作流程。(3)学生之间分组进行实验,加强相互协作及团队意识。在食品科学与工程、食品营养、食品质量与安全、生物工程等专业的食品分析实验课中,我们为部分同学开设了ELISA综合实验,检测过的对象包括氯霉素、盐酸克伦特罗、三聚氰胺、和孔雀石绿等。本实验内容丰富充实,实验现象生动有趣,深受学生的欢迎。

作者:沈玉栋李瑞婷单位:华南农业大学食品学院

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