不同细管冻精对奶牛受胎的影响范文

《北京农业职业学院学报》2016年第4期

摘要：

为研究探讨奶牛细管冻精不同解冻方法对荷斯坦牛受胎效果的影响，试验对奶牛细管冻精经不同方法解冻后精子活力、有效存活时间以及输精后第一情期受胎率进行了研究，结果表明：（1）在5℃和15℃解冻时精子活率低于0.35，差异不显著(P＞0.05)；90℃解冻后活率显著低于40℃、75℃组(P＜0.05)，其中75℃解冻3s精子的活率最高，解冻效果最好；在40℃解冻20s效果较好。（2）在40℃和75℃解冻后，精子存活时间随解冻温度升高而缩短，其中40℃解冻后精子有效存活时间较75℃差异极显著（P<0.01）。（3）冻精采用75℃3s解冻后输精较40℃解冻20s第一情期受胎率高5.45%，差异不显著（P＞0.05）。

关键词：

奶牛精液；解冻温度；解冻时间；精液品质；受胎率

奶牛冷冻精液质量的好坏，直接影响受胎率，影响着养牛户的经济效益。而解冻是冷冻精子复苏的关键步骤，解冻方案的选择则是冷冻精子复苏的关键点，对精子品质有极大的影响，制约着输精后的受胎率。针对现在生产实践中大部分牛场存在牛的人工授精受胎率不高的情况，为筛选出适合目前我国规模化牧场冷冻精液的解冻方案，本研究采用5种解冻方案对冷冻精液进行解冻并观察其解冻后活率、解冻后有效存活时间和输精后受胎效果3方面进行研究，以期筛选出适合我国目前冷冻精液的解冻方案。

1材料与方法

1.1冷冻精液与受配母牛的来源

购于北京奶牛中心的荷斯坦奶牛细管型冷冻精液，剂量均为0.25mL，同一批次随机解冻(20090307)、输精(11101610)选用。本次试验的牛为北京某牛场随机选择21头健康无病、发情及排卵都正常的荷斯坦母牛，皆是近年来参加冻精配种的牛群。在母牛自然发情的中、后期只输一次精，配后40d经直肠检查判定是否妊娠。

1.2试验设计

1.2.1解冻方法对奶牛细管冻精解冻后精子活率的影响

在低温、室温、体温及高温范围内设计5个水平：5℃、15℃、40℃、75℃、90℃；解冻时间设计15个处理，分别为：5℃(60s、90s、120s)、15℃(20s、40s、60s)、40℃(10s、20s、30s)、75℃(3s、5s、7s)、90℃（1s、3s、5s）。解冻后通过显微镜主观评定精子活率，评定和比较不同处理的解冻效果，每个处理5个重复。

1.2.2解冻方法对奶牛细管冻精解冻后精子存活时间的影响

按照试验设计采用不同的解冻方法解冻后通过显微镜下主观评定精子活力及存活时间，每个处理5个重复。

1.2.3解冻方法对奶牛第一情期受胎效果的影响

用筛选好的解冻方法解冻精液后，在25±2℃的室温下镜检精子活力，并在30s内完成，然后马上进行输精。配种后45d进行直肠检查，确定是否受孕，并计算其第一情期受胎率。

1.3冻精的评估

通过评定解冻后精子的活率和存活时间来评估冻精的品质。

1.4输精方法

用筛选好的解冻方法将精液解冻后，在25±2℃室温下，在30s内镜检精子活力，然后马上输精。输精时间选在奶牛接受爬跨后8~14h，或滤泡发育的成熟中期。输精部位为子宫角分叉处，每头供试牛l个情期内只输精1次。且供试牛输精均由同一输精员操作，在1个月内完成所有配种工作，配后40d经直肠检查判定是否妊娠，确定怀孕数。

1.5统计分析

所得的试验结果用t检验和方差分析进行数据处理，确定差异的显著性（P<0.05）。

2结果与分析

2.1解冻方法对奶牛细管冻精解冻后精子活率的影响

如表1所示，采用不同解冻方法解冻，精子活率差异很大。在5℃和15℃解冻时精子活率差异不显著(P＞0.05)，而在40℃、75℃和90℃分别解冻不同的时间精子活率呈现出较大差异，90℃解冻后活率显著低于40℃、75℃组(P＜0.05)，其中在75℃解冻3s活率最高，40℃20s次之，90℃5s最低；而在5℃和15℃解冻精子活率低于0.35，不适合生产使用。

2.2解冻方法对奶牛细管冻精解冻后精子存活时间的影响

根据国标中规定，精子活力指在37℃环境下前进运动精子数占总精子数的百分率。活率≥35%为合格产品，由表1可见，冻精在5℃和15℃解冻后活率较低，不统计其生存时间。在40℃、75℃和90℃解冻后，精子存活时间随解冻温度升高而缩短，其中40℃解冻后精子有效存活时间较75℃差异极显著（P<0.01）。

2.3解冻方法对奶牛受胎效果的影响

由表2可见，40℃20s解冻组10头受试牛，成功妊娠4头，重复发情6头，第一情期受胎率为40.00%。75℃3s解冻组11头受试牛，妊娠5头，重复发情6头，第一情期受胎率为45.45%。统计分析两组第一情期受胎率差异不显著(P＞0.05)。

3讨论

目前，为了保证奶牛冷冻精液的受胎率，各种公牛站均严格按照牛冷冻精液国家标准进行冷冻精液生产。但生产实践中仍然存在冷冻精液使用效果欠佳的问题，众所周知保持冻精解冻后良好活力是人工授精成功的关键。而细管冻精的贮存、运输、取放、解冻等环节都直接影响到冻精解冻活力，其中解冻方法是影响细管冻精解冻后活力的主要因素，严重影响奶牛繁殖性能，直接影响到奶牛产犊间隔、产奶性能的发挥，相应也影响养牛户的经济效益。关于解冻方法，不同国家和不同学者所持观点不同。有学者认为，解冻温度与动物品种及精子膜对冷冻—解冻温度骤变的敏感性有关，但多数学者倾向于采用35℃～40℃解冻。在精液解冻过程中，造成精子死亡的主要原因是冰晶的形成造成精子物理性损伤和化学性伤害。解冻时要求尽快越过0℃～60℃这段危险温区，尽量缩短处于危险温区的时间。只有解冻后活力达到0.35以上，精液才具有受胎能力。在本试验中，奶牛细管冻精在5℃、15℃和90℃解冻，精子活率均低于0.35，不适合生产实践使用；75℃解冻3s精子活率最高，40℃解冻20s活率较高，二者差异不显著（P＞0.05）；其中40℃解冻后精子有效存活时间较75℃差异极显著（P<0.01）。此外，在本实验中某牛场随机选取的21头健康无病、发情及排卵都正常的荷斯坦母牛，皆是近年来参加冻精配种的牛群。由同一人在12月到1月份进行配种操作，尽可能排除诸如气候、季节、胎次、输精技术及输精时间等因素的影响，试验结果表明采用75℃3s解冻较40℃20s解冻的第一情期受胎率高5.45%，差异不显著（P＞0.05）。

4结论

在奶牛生产中，对于因位置、设备等条件限制解冻后不能立即输精的，建议采用40℃20s解冻；而对于解冻后可立即输精的采用75℃3s解冻，可获得较高的第一情期受胎率，进而提高养殖户经济效益。

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作者:乔利敏 辛敬涛 付静涛 肖西山 侯引绪 单位:北京农业职业学院 北京三力源牧业发展有限公司