化妆品中甲醛毒性的测定法研究范文

《日用化学工业杂志》2014年第五期

1实验部分

1.1主要仪器及试剂SynergyH1全功能微孔板检测仪(检测仪序列号269900)，美国伯腾公司;隔水式恒温培养箱，上海三发科技有限公司;移液器，赛默飞世尔公司。青海弧菌Q67冻干粉，华东师范大学提供;超纯水，Minipore公司;甲醛，色谱纯，默克公司。

1.2实验方法

1.2.1菌剂复苏与培养1)取适量－20℃保存的青海弧菌Q67冻干粉，加入5mL0.85%(质量分数，下同)的NaCl溶液，充分混合后于20℃放置15min，使青海弧菌Q67恢复稳定发光，所得菌液待用。2)培养基:混合盐10.0g，硫酸铵4.2g，葡萄糖10.0g，甘油3.0mL，胰胨1.0g，加水至1L，pH=8.5。混合盐:MgSO45.07g，MgCO32.25g，MgCl20.19g，CaCO30.06g，KCl0.44g，NaCl16.59g，KBr0.24g。将培养基置于500mL锥形瓶中，塞上棉球，用牛皮纸包扎好，经121℃高压灭菌20～30min后备用［4］。固体培养基:培养基加2%琼脂即为固体培养基。固体培养基电炉加热使溶解至透明，趁热用漏斗分装于试管中，每支试管装至1/3，塞上棉球，用牛皮纸包扎好，经121℃高压灭菌20～30min后取出制成斜面。将青海弧菌Q67冻干粉用0.5mL0.85%的NaCl溶液溶解，迅速转入50mL培养基中，22℃恒温培养，每24h后转接一次斜面，将培养好的第三代斜面置4℃冰箱中备用。3)检测用菌液制备:将培养好的菌种接入含有固体培养基的平板中，22℃恒温培养12～18h后加5mL0.85%的NaCl溶液至青海弧菌Q67平板中，适当振荡将菌体冲下，以漩涡振荡器将菌液摇匀，测定其吸光度值，并用0.85%的NaCl溶液将细菌浓度调节至合适范围后备用。

1.2.2标样配制及样品处理标样配制:用超纯水将甲醛配制成一定质量浓度的标准液，再用超纯水分别稀释至6个质量浓度，根据先前的试验结果，使得6个质量浓度的甲醛溶液产生的发光强度抑制率在0～100%均匀分布。样品处理:准确称取1.0g预先混匀的样品于10mL磨口具塞比色管中，加入1mLTween80，加0.85%的NaCl溶液至10mL，轻摇至样品充分溶解，用0.45μm滤膜过滤，待用。

1.2.3甲醛的毒性检测向96孔板中的A1孔加入200μL的超纯水(作为本底)，A2孔加入200μL的超纯水(作为空白对照)，A3—A8孔分别依次加入上述甲醛标样，再于A2—A8孔中分别加入1.2.1所得菌液50μL(或100μL)，在B和C排做平行样，然后放入SynergyH1检测仪中，检测5，10，15和30min时青海弧菌Q67的发光强度。

1.2.4数据处理通常用相对发光强度反映毒性大小:毒性越大则对发光抑制越厉害，相对发光强度就越小，反之则发光强度越大。相对发光强度的计算公式为:相对发光强度=(样品发光强度/对照发光强度)×100%根据拟合剂量－效应曲线，计算甲醛与青海弧菌Q67作用不同时间的半效应浓度(EC50)，并以此判断甲醛对青海弧菌Q67毒性的大小。

2结果与讨论

用超纯水将甲醛标准液分别稀释至6个质量浓度(0，0.01，0.02，0.03，0.04和0.05g•L－1)，然后进行检测。作用时间为5，10，15和30min时，不同质量浓度的甲醛对青海弧菌Q67的剂量－效应拟合曲线见图1。由图1可以看出，随着甲醛质量浓度的升高，青海弧菌Q67的相对发光强度逐渐降低，两者成线性负相关;随着作用时间的延长，青海弧菌Q67的相对发光强度逐渐降低，在15min时，线性方程为y=－1456.7x+97.814，相关系数R2=0.995，甲醛对青海弧菌Q67的效应拟合曲线线性较好，甲醛对青海弧菌Q67的EC50为0.033g•L－1。甲醛对青海弧菌Q67的最低检测限为0.01g•L－1。使用发光细菌法检测了8个化妆品(编号1—8)的甲醛毒性情况，结果见表1。由表1可知，根据标准曲线计算，在5～30min内，用发光细菌检测的8个化妆品中，3号，5号和8号样品中的甲醛质量分数分别为0.0022%，0.0015%和0.0028%，均低于0.2%，其余5个样品均未检出甲醛。6号加标样品15min时相对发光强度为70.86%，根据标准曲线计算得出其甲醛质量浓度为0.019g•L－1，加标回收率约为95%。

分别采用发光细菌法(15min时相对发光强度下)和《化妆品卫生规范》(2007年版)中的甲醛检测方法检测化妆品中的甲醛含量，结果见表2。由表2可知，发光细菌法测定的甲醛含量同标准方法测得的甲醛含量基本一致。综上，发光细菌法进行甲醛毒性的检测，能直接、客观地反映出甲醛对生物的急性毒性。对于人为添加原因造成的甲醛残留，毒性测试可在15min内快速现甲醛的毒性。由于化妆品成分复杂，干扰因素较多，在以后的实验过程中，应结合其他甲醛标准检测方法，进一步研究甲醛对发光细菌毒性的影响，同时根据不同的样品，探索样品前处理方法，使得甲醛毒性检测尽量规避其他基质的影响［6－7］。在分析前，还需对一些特定的检测和一些特别的样品进行测试前的准备。

3结论

甲醛对青海弧菌Q67的毒性存在显著的剂量－效应关系，且效应能够在短时间(15min左右)内显现并达到较佳效果，甲醛对青海弧菌Q67的EC50为0.033g•L－1。甲醛对青海弧菌Q67的最低检测限为0.01g•L－1，所以发光细菌法可以用于快速检测并判定其是否超标。。

作者：张林张鹏邹勇平周元元王磊傅芳芳赵渝单位：国家洗漱用品质量监督检验中心扬州市产品质量监督检验所上海师范大学