美章网 资料文库 薄层色谱荧光分光光度法测定黄连中小檗碱含量范文

薄层色谱荧光分光光度法测定黄连中小檗碱含量范文

时间:2022-05-27 10:59:22

摘要建立了薄层色谱-荧光分光光度法测定黄连中小檗碱的含量。以1%盐酸甲醇为溶剂超声提取,用苯-醋酸乙酯-甲醇-异丙醇-氨(6∶3∶1.5∶1.5∶0.5)展开,甲醇洗脱,调节pH值为12,在Ex=365nm,Em=409nm的条件下测定其荧光强度,线性范围为0.012~0.12ng/ml,r=0.9991,平均回收率为97.5%。

关键词:薄层色谱-荧光分光光度法;黄连;小檗碱

黄连为毛莨科植物黄连(CoptischinensisFranch)、三角叶黄连(CoptisdeltoidesC.Y.ChengetHsiao)或云连(CoptisteetaWall)的干燥根茎。其主要生物活性成分为小檗碱。本文采用薄层色谱-荧光分光光度法测定黄连药材中小檗碱的含量。

1仪器与试药

1.1仪器RF-540型荧光分光光度仪,CS-930双波长薄层扫描仪(日本岛津)。

1.2试药盐酸小檗碱对照品(中国药品生物制品检定所);黄连药材(市售)。

2方法与结果

2.1对照品溶液的制备精密称取盐酸小檗碱对照品适量,加入甲醇制成1mg/ml贮备液。用前取贮备液适量用甲醇稀释成20μg/ml的对照品溶液。

2.2薄层色谱条件〔1,2〕以苯-醋酸乙酯-甲醇-异丙醇-氨(6∶3∶1.5∶1.5∶0.5)为展开剂,展开前用氨水饱和15min,展距为13cm,晾干后置紫外灯(365nm)下检视,小檗碱呈现黄绿色荧光斑点(Rf=0.37)。

2.3荧光测定条件的选择

2.3.1pH条件的选择取0.1ml对照品溶液,加入不同体积的1mol/L氢氧化钠溶液,在Ex=365nm,Em=409nm处测定盐酸小檗碱的荧光强度。结果显示20mmol/L氢氧化钠溶液荧光强度最大(见表1)。

表1氢氧化钠浓度对小檗碱荧光强度的影响

氢氧化钠(mmol/L)512.5202550小檗碱荧光强度11.649.181.765.928.1

2.3.2荧光光谱的绘制取对照品溶液用甲醇稀释成约100ng/ml(碱液浓度为20mmol/L),进行荧光强度扫描测定,从扫描图谱得到小檗碱最大激发波长365nm,最大发射波长为409nm(见图1)。

2.4线性关系及精密度试验取对照品溶液2,8,12,16,20μl分别点于同一薄层板上,依法展开、洗脱,将洗脱液依次移入试管内,精密加入甲醇2ml,1mol/L氢氧化钠溶液75μl,摇匀后测定荧光强度。结果表明,小檗碱在0.012~0.12ng/ml范围内与荧光强度有良好的线性关系,线性方程为F=24.17+164.0C,r=0.9991。采用外标两点法计算样品中小檗碱的含量。精密度实验结果表明,同板误差RSD=2.14%,板间误差RSD=2.79%(n=5)。

2.5样品含量测定取黄连药材粉末约0.2g,精密称定,加1%盐酸甲醇溶液约150ml,60℃水浴加热15min,超声30min,加甲醇稀释至200ml,摇匀,静置后取上清液作为供试品溶液。精密吸取对照溶液4,8μl及黄连提取液2μl点于同一硅胶G板上,展开,将板上相应斑点刮入离心管中,加入甲醇1ml,振摇约15min,超声20min,离心10min(4000r/min),吸取上清液0.8ml于试管内,加入甲醇2ml和1mol/L氢氧化钠溶液75μl,摇匀,测定荧光强度,结果3批黄连药材中小檗碱平均含量为5.16%(g/g)。

2.6回收率试验取已知小檗碱含量的黄连药材5份,精密称定,加入与小檗碱含量相当的对照品溶液,溶剂挥干后,依2.5项下操作,测定小檗碱的含量。结果表明平均回收率为96.5%,RSD=5.70%。

3讨论

文中采用的薄层展开条件优于文献报道方法,灵敏度高,选择性好,能够将小檗碱与其他成分有效分离,且斑点圆整,无拖尾现象。适用于小檗碱的痕量分析及复方制剂中小檗碱的含量分析。

参考文献

〔1〕中国药典中药薄层色谱彩色图集.1993:70

〔2〕中国药典2000年版.一部.2000:251

〔3〕藏凤和.薄层-比色法测定黄连中小檗碱的含量.药物分析杂志,1986,6(2):100新晨

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