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沙利度胺对人宫颈癌细胞增殖抑制的影响

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【摘要】目的:目的:探讨沙立度胺对人宫颈癌Hela细胞增殖抑制的作用。方法方法方法:::体外培养宫颈癌Hela细胞株,加入不同浓度的沙利度胺(50、100、200ug/ml),同时设空白对照组;采用MTT法测量各组细胞增殖抑制率,Western-blot法检测细胞中环氧化酶-2(COX-2)的变化。结果:结果:结果:沙利度胺对人宫颈癌Hela细胞的生长具有明显的抑制作用,并随药物浓度和时间的增加实验组中细胞的抑制率逐渐增加,较对照组差异有显著性(P<0.05);实验组中COX的表达均低于对照组(P<0.05)。结论:结论:结论:沙利度胺对宫颈癌Hela细胞的生长具有抑制作用,其机制可能与下调COX-2有关。

【关键词】沙利度胺;宫颈癌细胞;环氧化酶-2.

沙利度胺一个曾给人类带来上万名婴儿肢体畸形的药物,最近研究显示其具有广泛免疫调节作用和抗血管形成作用[1],而被逐渐引起重视。为进一步研究沙利度胺的抗肿瘤作用,本研究旨在观察沙利度对宫颈癌Hela细胞抑制作用,并探讨其可能的作用机制,为其在宫颈癌的临床应用提供理论依据。

1材料与方法

1.1材料

人宫颈癌细胞株Hela购于河北医科大学第四附属医院细胞库,沙利度胺(Thal)、DMSO、0.25%姨酶均系购于美国Sigma公司产品,胎牛血清购于杭州四季青生物工程材料公司,RPMI1640购自美国Gibco公司,兔人抗COX-2试剂盒购自美国Sigma公司。

1.2方法

1.2.1细胞培养

将Hela细胞置于含10%小牛血清培养液,于37℃、5%CO2的培养箱中培养。以每周传代2-3次,取对数生长期细胞用于实验。

1.2.2MTT法检测沙利度胺对宫颈癌Hela细胞增殖的影响

取对数生长期的Hela细胞,以1x106/ml,接种于96孔培养板每孔100ul,细胞贴壁生长24小时后,弃去培养液。实验组分三组(高浓度组、中浓度组、低浓度组)分别加入Thal浓度50、100、200ug/ml的培养液200ul,空白对照组加入DMSO的培养液200ul。每孔设6个复孔。分别培养24、48、72h后,每孔加入5mg/mlMTT100ul,继续培养4h,弃去培养液,加入DMSO100ul震荡10分钟,使结晶充分溶解,用全自动酶标仪检测490nm处每孔的吸光度(A),计算增殖抑制率。细胞增殖抑制率(%)=(1-实验组A值/空白对照组A值)x100%,实验重复三次,取平均值。

1.2.3Westernblot法对COX-2表达检测

分组同上,分别取各组人宫颈癌Hela细胞,用蛋白裂解液充分的裂解细胞;离心,取上清提取总蛋白;采用酚试剂法进行对蛋白定量;采用聚丙烯酰胺凝胶电泳和电转仪将蛋白转印至PVDF膜,封闭,过夜;按说明书要求加入待检测的一抗以及相应的二抗,显色,扫描测定杂交带的灰度值,用目的蛋白活性片段与内参β-肌动蛋白灰度值的相对比值代表各COX-2活化蛋白的相对含量。操作步骤严格按照试剂盒说明书进行。

1.3统计学方法

利用软件SPSS19.0进行统计学分析,各组数据以sx±的形式表示,组与组间均数用t检验,P≤0.05为差异具有统计学意义。

2结果

2.1不同浓度沙利度胺对Hela细胞增殖的抑制作用

采用MTT法测定细胞增殖抑制率可知沙利度胺实验组细胞生长出现明显抑制,随着沙利度胺浓度增加,抑制率显著升高(P<0.05),相同药物浓度,随着作用时间延长,抑制率显著升高(P<0.05),呈显剂量-效应依赖关系。

3讨论

宫颈癌是妇科最常见的恶性肿瘤之一,其发病率及病死率在我国呈显上升和年轻化趋势,严重危害妇女健康和生命[2]。而传统化疗方案在宫颈癌治疗方面疗效欠佳,且毒副作用大、易发生耐药性,因此寻找新的、有效的、毒副作用小的化疗药物至关重要。沙利度胺(反应停,酞咪哌叮酮,thalidomide)曾因严重的致畸作用而被禁用。近年来研究表明沙利度胺具有抗肿瘤作用,并可通过抑制血管形成[3],而抑制肿瘤的生长,但尚未见在宫颈癌中报道。

本实验用不同浓度的沙利度胺作用于宫颈癌Hela细胞后,通过MTT法观察发现,沙利度胺可抑制细胞的生长,且随着药物浓度的增加及作用时间的延长而逐渐增强,说明沙利度胺对宫颈癌Hela细胞生长的抑制作用具有一定的量效、时效性,提示沙利度胺可能通过抑制肿瘤细胞增殖而起到抗肿瘤作用。COX-2(cyclooxgenase-2)是前列腺素合成限速酶,在正常组织中不表达或表达水平较低,而在许多恶心肿瘤中存在高表达,如肺癌、胰腺癌、大肠癌等[45]。COX-2可能通过某种机制上调某些因子如VEGF等的表达而促进了肿瘤细胞的浸润及转移能力[6]。而COX-2抑制剂可通过影响COX-2的活性来阻止肿瘤发生及诱导肿瘤细胞早期凋亡。研究证实,COX-2在宫颈癌中高表达,并与宫颈癌的发生发生展、侵袭转移相关[78]。

本研究结果显示,肿瘤细胞COX-2表达情况随沙利度胺剂量增加逐渐降低。综上所述,沙利度胺可抑制宫颈癌Hela细胞的生长,并可通过减少细胞内的COX-2表达,从而抑制宫颈癌细胞的增殖与迁移能力,为其在宫颈癌的分子靶向治疗提供了理论依据。参考文献:[1]SHORTTJ,HSUAK,JOHNSTONERW.Thalidomide-analoguebiologyimmunologicalmolecularandepigenetictargetsincancertherapy[J].Oncogene,2013,32(36):4191-4202..[2]张晗雪,张新.宫颈癌保留生育功能手术的临床病例报道及文献复习[J],中华临床医师杂志,2015,9(5):865-868.[6]管小青,顾书成,吴骥,等.生存素和COX-2在乳腺癌复发及转移癌组织的表达[J].江苏医药,2012,38(1):33-35[7]徐惠勤,王琼.宫颈癌患者血清和组织MMPCOX-2CD147和IGF的变化研究.浙江临床医学,2015(17):535-536.[8]曹卉,刘颖.COX-2与Bcl-2蛋白在公家鳞癌中的表达及其与宫颈鳞癌发生发展的关系研究.临床和检验医学杂志,2015(14):1692-1695.

作者:杨丽萍;侯俊德;冯海芹(通讯作者);刘凌凌;李哲;韩丹 单位:河北省邯郸市中心医院

沙利度胺对人宫颈癌细胞增殖抑制的影响责任编辑:张雨    阅读:人次